Question

7．內(nèi)皮素（ET）是一種多肽，主要通過與靶細胞膜上的ET受體（ET_A）結合而發(fā)揮生物學效應．科研人員通過構建表達載體，實現(xiàn)ET_A基因在大腸桿菌細胞中的高效表達，其過程如下圖所示，圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的識別序列為，限制酶XhoⅠ的識別序列為．請據(jù)圖分析回答：

（1）進行過程①時，需要加入緩沖液、引物、dNTP和反轉錄（逆轉錄）酶等．完成過程①②③的目的是獲取目的基因（ET_A基因）．
（2）過程③和⑤中，限制酶XhoⅠ切割DNA，使磷酸二酯鍵斷開，形成的黏性末端是．
（3）構建的重組表達載體，目的基因上游的啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位，進而可驅(qū)動基因的轉錄．除圖中已標出的結構外，基因表達載體還應具有的結構是終止子．
（4）過程⑥要用CaCl₂預先處理大腸桿菌，使其成為容易吸收外界DNA的感受態(tài)細胞．
（5）將SNAP基因與ET_A基因結合構成融合基因，其目的是有利于檢測ET_A基因能否表達及表達量．

Answer 1

分析 根據(jù)題意和圖示分析可知：①②③表示反轉錄法獲得目的基因的過程，④表示構建基因表達載體，⑤表示限制酶切割質(zhì)粒，⑥表示重組質(zhì)粒導入受體細胞，⑦表示目的基因的檢測．

解答 解：（1）過程①以mRNA合成目的基因，所以需要加入緩沖液、原料、逆轉錄酶和ATP和引物等，完成過程①②③的目的是 獲取目的基因（ET_A基因）．
（2）過程③和⑤利用限制酶XhoⅠ切割DNA獲得目的基因的過程，限制酶使得DNA的磷酸二酯鍵斷開，形成的黏性末端是．
（3）目的基因上游的啟動子的作用是RNA聚合酶識別和結合的部位，驅(qū)動基因的轉錄，除圖示結構外，完整的基因表達載體還應具有復制原點、終止子等結構．
（4）過程⑥中，要用CaCl₂預先處理大腸桿菌，使其成為處于容易吸收外界DNA的感受態(tài)的細胞．
（5）利用SNAP基因與ET_A基因結合構成融合基因，目的是檢測ET_A基因能否表達及表達量．
故答案為：
（1）反轉錄（逆轉錄）             獲取目的基因（ET_A基因）
（2）磷酸二酯                     
（3）RNA聚合酶識別和結合          終止子
（4）感受態(tài)
（5）ET_A基因能否表達及表達量

點評 本題考查基因工程的相關知識，意在考查學生的識圖能力和判斷能力，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，能結合圖中信息并運用所學知識綜合分析問題和解決問題的能力．