Question

【題目】西瓜花葉病毒（WMV）主要侵害西瓜、甜瓜等各種瓜類作物，造成瓜類發(fā)病或減產�？蒲腥藛T利用單克隆技術制備出抗WMV的特異性單抗，并以其為核心建立能快速有效地檢測WMV的方法，可用于田間西瓜花葉病毒病的診斷和檢測�；卮鹣铝袉栴}。

（1）以提純的WMV病毒作為抗原，對小鼠進行免疫，常用化學誘導劑__________將小鼠的__________和骨髓瘤細胞進行細胞融合。

（2）可利用選擇培養(yǎng)基對融合細胞進行初步篩選，需要淘汰的融合細胞為__________。隨后將選出的細胞多倍稀釋，接種在特定細胞培養(yǎng)板上，使這些單細胞克隆生長，最終選出能穩(wěn)定分泌__________的雜交瘤細胞。

（3）將選出的雜交瘤細胞注入小鼠腹腔制備單抗腹水，一段時間后收集并純化腹水，進行抗體效價和類型的測定。也可對克隆的雜交瘤細胞進行____________，更能持久地得到單一的抗體。單抗比一般抗血清優(yōu)越得多，原因是____________。

（4）抗WMV的單克隆抗體還可作為特異性探針，利用__________方法找出能與探針特異性結合的基因表達產物，進而實現(xiàn)從抗病性強的西瓜植株中獲取抗病目的基因，該目的基因能否在其他植物體內穩(wěn)定存在并遺傳的關鍵是___________。

Answer 1

【答案】聚乙二醇（或PEG） 脾臟細胞（B淋巴細胞） 融合的脾細胞一脾細胞、融合的瘤細胞一瘤細胞 抗WMV單克隆抗體 傳代培養(yǎng)（體外培養(yǎng)） 純度高、靈敏度高、識別抗原部位專一 抗原一抗體雜交 目的基因是否整合到受體細胞的染色體上

【解析】

1、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應，之后從小鼠脾臟中獲取已經免疫的B淋巴細胞；誘導B細胞和骨髓瘤細胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞；進行抗體檢測，篩選出能產生特定抗體的雜交瘤細胞；進行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。

2、動物細胞培養(yǎng)需要滿足以下條件

①無菌、無毒的環(huán)境：培養(yǎng)液應進行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，以防培養(yǎng)過程中的污染。此外，應定期更換培養(yǎng)液，防止代謝產物積累對細胞自身造成危害。
②營養(yǎng)：合成培養(yǎng)基成分：糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等。通常需加入血清、血漿等天然成分。

③溫度：適宜溫度：哺乳動物多是36.5℃+0.5℃；pH：7.2～7.4。

④氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO2。O2是細胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。

3、單克隆抗體的作用：①作為診斷試劑：（最廣泛的用途）具有準確、高效、簡易、快速的優(yōu)點。

②用于治療疾病和運載藥物：主要用于治療癌癥，可制成“生物導彈”。

（1）以提純的WMV病毒作為抗原，對小鼠進行免疫，可用物理、化學或生物方法誘導細胞融合，常用化學誘導劑聚乙二醇將小鼠的B淋巴細胞（漿細胞）和骨髓瘤細胞進行細胞融合。

（2）可利用選擇培養(yǎng)基對融合細胞進行初步篩選，需要淘汰的融合細胞為激活的B淋巴細胞——激活的B淋巴細胞以及骨髓瘤細胞——骨髓瘤細胞，而保留融合的B細胞一瘤細胞即雜交瘤細胞；隨后將選出的細胞多倍稀釋，接種在特定細胞培養(yǎng)板上，使這些單細胞克隆生長，最終選出能穩(wěn)定分泌特定抗體（抗WMV單克隆抗體）的雜交瘤細胞。

（3）將選出的雜交瘤細胞注入小鼠腹腔制備單抗腹水，一段時間后收集并純化腹水，進行抗體效價和類型的測定。也可對克隆的雜交瘤細胞進行體外培養(yǎng)，更能持久地得到單一的抗體。單抗比一般抗血清優(yōu)越得多，其純度高、靈敏度高、識別抗原部位專一。

（4）抗WMV的單克隆抗體還可作為特異性探針，利用抗原一抗體雜交方法找出能與探針特異性結合的基因表達產物，進而實現(xiàn)從抗病性強的西瓜植株中獲取抗病目的基因，該目的基因能否在其他植物體內穩(wěn)定存在并遺傳的關鍵是目的基因是否整合到受體細胞的染色體上。