Question

20．1986年，美國的Powell-Abel首次將煙草花葉病毒（TMV）的外殼蛋白基因導入煙草并獲得抗TMV的轉基因煙草植株．如圖為轉基因煙草培育過程流程圖．請回答下列問題：
（1）TMV是一種RNA病毒，獲取TMV外殼蛋白基因的方法是逆轉錄法．攜帶外源基因的質粒中標記基因的作用是鑒別受體細胞中是否含有目的基因，并將含有目的基因的細胞篩選出來．
（2）圖中目的基因導入煙草細胞的方法是農桿菌轉化法，感染過程利用了農桿菌中Ti質粒上的T-DNA，使外源基因進入并整合到煙草染色體DNA上．
（3）A培養(yǎng)皿中發(fā)生的過程是脫分化，C、D培養(yǎng)皿中發(fā)生的過程是再分化，C、D培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基在成分上的主要區(qū)別是生長素和細胞分裂素的比例不同．
（4）檢測抗TMV的轉基因煙草植株是否成功的實驗設計思路是將普通煙草和轉基因煙草種植在相同的環(huán)境中，分別用煙草花葉病毒進行感染，觀察煙草是否出現花葉病．

Answer 1

分析 1、基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、分析題圖：圖示采用了基因工程技術和植物細胞工程技術，A表示脫分化過程，CD表示再分化．

解答 解：（1）TMV是一種RNA病毒，可采用逆轉錄法獲取TMV外殼蛋白基因，即以RNA為模板逆轉錄形成TMV基因．標記基因的作用是鑒別受體細胞中是否含有目的基因，并將含有目的基因的細胞篩選出來．
（2）將目的基因導入植物細胞常用農桿菌轉化法；農桿菌中的Ti質粒上的T-DNA可轉移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體的DNA上．根據農桿菌的這一特點，如果將目的基因插入到Ti質粒的T-DNA上，通過農桿菌的轉化作用，就可以把目的基因整合到植物細胞中染色體的DNA上．
（3）A培養(yǎng)皿中發(fā)生的過程是脫分化過程，C、D培養(yǎng)皿中發(fā)生的過程是再分化；C中是生根、D中是長芽，因此C、D培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基在成分上的主要區(qū)別是生長素和細胞分裂素的比例不同．
（4）檢測抗TMV的轉基因煙草植株是否成功的實驗設計思路是：將普通煙草和轉基因煙草種植在相同的環(huán)境中，分別用煙草花葉病毒進行感染，觀察煙草是否出現花葉�。�
故答案為：
（1）逆轉錄法   鑒別受體細胞中是否含有目的基因，并將含有目的基因的細胞篩選出來
（2）農桿菌轉化法  T-DNA
（3）脫分化   再分化   生長素和細胞分裂素的比例不同
（4）將普通煙草和轉基因煙草種植在相同的環(huán)境中，分別用煙草花葉病毒進行感染，觀察煙草是否出現花葉病

點評 本題結合圖解，考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理、操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能正確分析題圖，再結合所學的知識準確答題．