Question

【題目】人血清白蛋白（HSA）具有重要的醫(yī)用價值。下圖是以基因工程技術(shù)獲取HSA的兩條途徑，其中報告基因表達(dá)的產(chǎn)物能催化無色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色�；卮鹣铝袉栴}。

（1）基因工程中可通過PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因。生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是___________；在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是___________上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA分子雙鏈間的___________。

（2）已知堿性磷酸酶能除去核苷酸末端的5磷酸，構(gòu)建表達(dá)載體的過程中用該酶處理Ti質(zhì)粒，但HSA基因不用堿性磷酸酶處理，這樣做的目的是___________，經(jīng)過上述處理后的Ti質(zhì)粒在DNA連接酶的作用下可與HSA基因之間形成___________個磷酸二酯鍵，再經(jīng)相關(guān)處理獲得結(jié)構(gòu)完整的重組DNA分子。

（3）過程①中需將植物細(xì)胞與農(nóng)桿菌混合后共同培養(yǎng)后，還應(yīng)轉(zhuǎn)接到含___________的培養(yǎng)基上篩選出轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞。③過程中將目的基因?qū)�入綿羊受體細(xì)胞，采用最多，也是最為有效的方法是___________，還可以使用動物病毒作為載體，實現(xiàn)轉(zhuǎn)化。

（4）為檢測HSA基因的表達(dá)情況，可提取受體細(xì)胞的___________，用抗血清白蛋白的抗體進(jìn)行雜交實驗。

Answer 1

【答案】解旋酶 加熱至90~95℃ 氫鍵 防止Ti質(zhì)粒發(fā)生自身連接 2 無色物質(zhì)K 顯微注射技術(shù) 蛋白質(zhì)

【解析】

由圖可知，①表示將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞，②表示植物組織培養(yǎng)，③表示將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞，④需要經(jīng)過早期胚胎培養(yǎng)及胚胎移植等。

（1）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，在解旋酶的作用下可以解開DNA雙鏈；在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時，加熱至90~95℃引起模板DNA解鏈為單鏈，上述兩個解鏈過程均破壞了DNA分子雙鏈間的氫鍵。

（2）為了防止Ti質(zhì)粒發(fā)生自身連接，構(gòu)建表達(dá)載體的過程中用該酶處理Ti質(zhì)粒，但HSA基因不用堿性磷酸酶處理。目的基因兩端的序列均與質(zhì)粒連接，故在DNA連接酶的作用下可與HSA基因之間形成2個磷酸二酯鍵，再經(jīng)相關(guān)處理獲得結(jié)構(gòu)完整的重組DNA分子。

（3）由于報告基因表達(dá)的產(chǎn)物能催化無色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色，故過程①中需將植物細(xì)胞與農(nóng)桿菌混合后共同培養(yǎng)后，還應(yīng)轉(zhuǎn)接到含無色物質(zhì)K的培養(yǎng)基上篩選出轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞。③過程常用顯微注射法將目的基因?qū)�入綿羊受體細(xì)胞，還可以使用動物病毒作為載體，實現(xiàn)轉(zhuǎn)化。

（4）為檢測HSA基因的表達(dá)情況，看其是否表達(dá)出HAS，可提取受體細(xì)胞的蛋白質(zhì)，用抗血清白蛋白的抗體進(jìn)行雜交實驗，看是否出現(xiàn)雜交帶。