【題目】圖一為含有目的基因的DNA(外源DNA),圖二為某質(zhì)粒,表中是幾種限制酶識別序列及其切割位點。用圖中的外源DNA與質(zhì)粒構(gòu)建重組質(zhì)粒。請根據(jù)上述信息分析回答:

限制酶

Bam

Sma

EcoR

HinR

識別序列及切割位點

1外源DNA_____個游離的磷酸基團。

2DNA分子的一條多核苷酸鏈中,兩個脫氧核苷酸之間以__________相連。用SmaⅠ限制酶切割外源DNA,切開的是__________之間相連的鍵。

3如果用SmaⅠ酶切割外源DNA和質(zhì)粒來重組質(zhì)粒,其結(jié)果是_____

4如果使用EcoRⅠ酶切割外源DNA和質(zhì)粒,將目的基因片段與切割后的質(zhì)粒混合,加入_____酶,獲得的環(huán)狀DNA可能有哪幾種情況?_____。

5如果使用BamHⅠ和HinRⅢ兩種限制酶同時處理外源DNA和質(zhì)粒,比用EcoRⅠ酶切割的優(yōu)點是_____

6將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌中,培養(yǎng)基中需加入_____進行鑒別和篩選含有重組質(zhì)粒(目的基因)的細胞。

【答案】

12

2磷酸基團 五碳糖 G C

3目的基因與抗性基因被破壞

4DNA連接 原質(zhì)粒切割的粘性末端重新連接;目的基因的粘性末端連接而成環(huán)狀;目的基因與切割質(zhì)粒形成重組質(zhì)粒

5避免切割的外源DNA、質(zhì)粒的粘性末端自身環(huán)化

6抗生素

【解析】

1圖一中外源DNA為線性,因每條鏈上含有一個游離的磷酸基團,故外源DNA分子中有2個游離的磷酸基團。

2DNA分子的一條多核苷酸鏈中,兩個脫氧核苷酸之間以磷酸基團和五碳糖相連。由題可知,SamⅠ識別的DNA序列只有G和C,故用SmaⅠ限制酶切割外源DNA,切開的是G和C之間相連的鍵。

3由圖示可知,SmaⅠ酶切割位點位于抗性基因和目的基因中間,故如果用SmaⅠ酶切割外源DNA和質(zhì)粒來重組質(zhì)粒,其結(jié)果是目的基因與抗性基因被破壞。

4如果使用EcoRⅠ酶切割外源DNA和質(zhì)粒,將目的基因片段與切割后的質(zhì);旌,加入DNA連接酶,獲得的環(huán)狀DNA可能有原質(zhì)粒切割的粘性末端重新連接、目的基因的粘性末端連接而成環(huán)狀和目的基因與切割質(zhì)粒形成重組質(zhì)粒。

5如果使用BamHⅠ和HinRⅢ兩種限制酶同時處理外源DNA和質(zhì)粒,這樣目的基因的兩端的黏性末端不同,質(zhì)粒的兩端黏性末端也不同,故比用EcoRⅠ酶切割的優(yōu)點是避免切割的外源DNA、質(zhì)粒的粘性末端自身環(huán)化。

6由于重組質(zhì)粒上有抗性基因和目的基因,故可通過抗性基因的特性進行篩選,為了鑒定重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入大腸桿菌中,可在培養(yǎng)基中加入抗生素進行鑒別和篩選含有重組質(zhì)粒(目的基因)的細胞。

練習(xí)冊系列答案
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A.決定該地區(qū)稻螟蟲種群密度變化的因素有出生率、死亡率和遷入率、遷出率

B.甲圖曲線變化反映了鴨和稻螟蟲間存在負反饋調(diào)節(jié)機制

C.乙圖AB段,稻螟蟲初始數(shù)量為N0,且每天增加3%,t天后種群數(shù)量為N0×0.03t

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