Question

【題目】為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體的轉(zhuǎn)運肽基因相連，導入油菜細胞并獲得轉(zhuǎn)基因油菜品種。

（1）研究人員從陸地棉細胞中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫中獲取轉(zhuǎn)運肽基因，如圖為所示限制酶的識別位點。這樣可以用 （填酶）處理兩個基因后，可得到____________端（填圖中字母）相連的融合基因。

（2）將上述融合基因插入如圖2所示Ti質(zhì)粒的T-DNA中。構(gòu)建充足質(zhì)粒并導入農(nóng)桿菌中。將獲得的農(nóng)桿菌接種在含____________的固體平板上培養(yǎng)得到含融合基因的單菌落，再利用培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的浸染液。

（3）剪取油菜的葉片放入染液中一段時間，此過程的目的是利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜細胞，�?jīng)篩選后再將該油菜細胞通過植物組織培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)獲因油菜。整個過程涉及的原理是 。

Answer 1

【答案】（1）Cla 1（限制酶）和DNA連接酶 A、D

（2）四環(huán)素

（3）基因重組和植物細胞的全能性

【解析】

試題分析：（1）研究人員依據(jù)基因的已知序列設計引物，采用PCR法從陸地棉基因文庫中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫中獲取轉(zhuǎn)運肽基因．在上述引物設計時，分別在引物中加入如圖甲所示酶的識別序列，這樣可以用ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個基因后，得到A、D端相連的融合基因。

（2）將上述融合基因插入圖乙所示Ti質(zhì)粒的T-DNA中，構(gòu)建表達載體即重組質(zhì)粒并導入農(nóng)桿菌中．將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的浸染液。

（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜細胞，進一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜細胞，該細胞通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)，其原理為基因重組和植物細胞具有全能性。