Question

15．以小鼠為對象進行下列各項研究工作，請分析回答問題．
（1）在小鼠體細胞培養(yǎng)過程中，當貼壁細胞分裂生長時會出現接觸抑制現象而停止分裂增殖，此時瓶壁上形成細胞層數是單層（或一層）．
（2）體外受精之后，精核與卵核融合之前，用微型吸管除去雄核，再用細胞松弛素B處理（作用類似于用秋水仙素處理植物細胞），處理后的受精卵可發(fā)育成小鼠．這種方法在動物新品種選育中的顯著優(yōu)點是縮短獲得純合體的時間．
（3）培育轉基因小鼠時，通常以受精卵作受體細胞，為使外源基因在后代中長期保持，可將轉基因小鼠體細胞的細胞核轉入去核卵母細胞中構成重組細胞，使其發(fā)育成與供體具有相同性狀的個體．
（4）動物細胞培養(yǎng)過程中添加抗生素來防治污染；若保存細胞，通常在液氮（或冷凍）條件下，因為在這種條件下，細胞中酶的活性降低，細胞代謝速率降低．
（5）單克隆抗體的制備中，首先需向小鼠注射相應的抗原，以產生相應的效應B細胞，讓該細胞與骨髓瘤細胞融合，融合后經選擇培養(yǎng)得到的雜交瘤細胞還需進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經多次篩選可獲得雜交瘤細胞注射到小鼠腹腔，從腹水中獲得特異抗體，這種細胞的特點是既能產生特異性抗體又能無限增殖．

Answer 1

分析 1、動物細胞培養(yǎng)的流程：取動物組織塊（動物胚胎或幼齡動物的器官或組織）→剪碎→用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞→制成細胞懸液→轉入培養(yǎng)瓶中進行原代培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)．
2、細胞貼壁和接觸抑制：懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細胞貼壁．細胞數目不斷增多，當貼壁細胞分裂生長到表面相互抑制時，細胞就會停止分裂增殖，這種現象稱為細胞的接觸抑制．
3、體外受精主要包括：卵母細胞的采集和培養(yǎng)、精子的采集和獲能、受精．動物核移植是將動物的一個細胞的細胞核移入一個去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體，核移植得到的動物稱克隆動物．
4、單克隆抗體的制備流程：人工誘導經過免疫的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，再經篩選獲得能產生特定抗體的雜交瘤細胞，通過培養(yǎng)獲得的雜交瘤細胞得到單克隆抗體．

解答 解：（1）在小鼠體細胞培養(yǎng)過程中，當貼壁細胞分裂生長時會出現接觸抑制現象而停止分裂增殖，此時瓶壁上形成細胞層數是單層（或一層）．
（2）處理后的受精卵由于只有雌核，而細胞松弛素B處理作用類似于用秋水仙素處理植物細胞，所以處理后的受精卵染色體數目將加倍，這種方法在動物新品種選育中的顯著優(yōu)點是容易獲得純合子并縮短育種時間（同植物的單倍體育種）．
（3）培育轉基因小鼠時，通常以受精卵作受體細胞，為使外源基因在后代中長期保持，可將轉基因小鼠體細胞的細胞核轉入去核卵母細胞中構成重組細胞，使其發(fā)育成與供體具有相同性狀的個體．
（4）動物細胞培養(yǎng)過程中添加抗生素來防治污染；若保存細胞，通常在液氮（或冷凍）條件下，因為在這種條件下，細胞中酶的活性降低，細胞代謝速率降低．
（3）單克隆抗體的制備中，首先需向小鼠注射相應的抗原，以產生相應的效應B細胞，讓該細胞與骨髓瘤細胞融合，融合后經選擇培養(yǎng)得到的雜交瘤細胞還需進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經多次篩選可獲得雜交瘤細胞，將產生特異抗體的雜交瘤細胞注射到小鼠腹腔，從腹水中獲得特異抗體，雜交瘤細胞的特點是：既能產生特異性抗體又能無限增殖
故答案為：
（1）接觸抑制   單層（或一層）     
（2）縮短獲得純合體的時間
（3）受精卵    細胞核   去核卵母   
（4）抗生素       酶
（5）相應的抗原     克隆化培養(yǎng)    抗體檢測       雜交瘤細胞    既能產生特異性抗體又能無限增殖

點評 本題綜合考查動物細胞培養(yǎng)、核移植和單克隆抗體的相關知識，重點考查動物細胞培養(yǎng)的相關內容，要求考生識記動物細胞培養(yǎng)的過程、條件和應用等知識，能靈活的運用所學的知識解答問題．動物細胞培養(yǎng)需要滿足以下條件：①無菌、無毒的環(huán)境；②營養(yǎng)；③溫度和pH；④氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO₂．