如圖表示含有目的基因D的DNA片段長度（bp即堿基對）和部分堿基序列，圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列．現(xiàn)有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4種限制性核酸內(nèi)切酶切割的堿基序列和酶切位點分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．請回答下列問題：
（1）用圖1中的外源DNA（含有目的基因D）和圖2中的質(zhì)粒構(gòu)建重組質(zhì)粒需要使用限制酶和
．前者（酶）的專一性很強，其作用特點是
．
（2）應(yīng)該使用限制酶BamHⅠ同時處理質(zhì)粒、外源DNA，而不選擇其他3種，原因在于
．（多選） A．若使用SmaⅠ或者MspⅠ會破壞目的基因．
B．若使用SmaⅠ切割質(zhì)粒，能成功切開質(zhì)粒得到粘性末端的可能很低．
C．若使用MboⅠ切割質(zhì)粒，質(zhì)粒上會有2處被切開，會將質(zhì)粒切成兩段不利于篩選．
D．使用限制酶BamHⅠ能保證目的基因和質(zhì)粒獲得相同的粘性末端，以便目的基因和運載體定向連接，不至于反向連接．
E．使用BamHⅠ切割質(zhì)粒，質(zhì)粒上會有1處被切開，破壞抗生素A抗性基因，保留抗生素B抗性基因，以便于將來篩選含目的基因的受體細胞．
F．只有使用BamHⅠ切割，才能保證質(zhì)粒和目的基因上產(chǎn)生相同的粘性末端．
（3）若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對被T-A堿基對替換，那么基因D就突變?yōu)榛騞．從雜合子分離出圖1及其對應(yīng)的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，產(chǎn)物中共有
種不同DNA片段．若同時用限制酶MspⅠ、MboⅠ切割圖2中的質(zhì)粒，則可得到
個DNA片段．
（4）為了篩選出成功導入含目的基因D的重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般可進行如下步驟篩選：
第一步：將大腸桿菌在含
的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖3的菌落．
第二步：再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含
的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖4的結(jié)果（空圈表示與圖3對照無菌落的位置）．
第三步：選出圖3培養(yǎng)皿中的某些菌落進行培養(yǎng)，即可得到含重組質(zhì)粒的大腸桿菌．請在圖3中圈出含目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌的菌落
以上篩選方式至少需要兩步，其實還有其他更簡單的操作方法．請閱讀下列材料，回答問題．
大腸桿菌pUC118質(zhì)粒的某限制酶唯一酶切序列，位于該質(zhì)粒的lacZ基因中．lacZ基因中如果沒有插入外源基因，便可表達出β-半乳糖苷酶．當培養(yǎng)基中含有A物質(zhì)時，A物質(zhì)便會被β-半乳糖苷酶水解成藍色，大腸桿菌將形成藍色菌落；如果lacZ基因中插入了外源基因，帶有pUC118質(zhì)粒的大腸桿菌便不能表達β-半乳糖苷酶，培養(yǎng)基中的A物質(zhì)不會被水解成藍色，大腸桿菌將形成白色菌落．pUC118質(zhì)粒還攜帶了氨芐青霉素抗性基因．如圖5是利用lacZ基因篩選重組質(zhì)粒示意圖．
（5）用圖5中的培養(yǎng)基中篩選導入了重組質(zhì)粒的受體大腸桿菌，制備時除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機鹽、水、生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)外還應(yīng)加入物質(zhì)應(yīng)包括
（多選） A．伊紅美藍試劑 B．瓊脂 C．A物質(zhì) D．氨芐青霉素 E．四環(huán)素 F．噬菌體
（6）將上述處理后的大腸桿菌置于圖5中培養(yǎng)基上培養(yǎng)，以檢測受體大腸桿菌是否導入重組質(zhì)粒，結(jié)果可能出現(xiàn)藍色或者白色菌落，其中
色大腸桿菌菌落即為含重組質(zhì)粒的目的菌．
