Question

7．在用基因工程技術構建抗除草劑的轉基因煙草過程中，下列操作正確的是（　�。�

• A． 用限制性核酸內切酶切割煙草花葉病毒的核酸
• B． 用DNA連接酶連接經切割的抗除草劑基因和載體
• C． 將重組DNA分子導入煙草原生質體
• D． 用含除草劑的培養(yǎng)基篩選轉基因煙草細胞

Answer 1

分析 基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：A、限制性核酸內切酶只能切割特定的脫氧核苷酸序列，而煙草花葉病毒的核酸是核糖核酸，且為單鏈，A錯誤；
B、構建基因表達載體時，需要用限制酶切割得到抗除草劑基因和切開載體，再用DNA連接酶將兩者連接形成重組DNA，B正確；
C、基因表達載體構建好之后，需要將重組DNA分子導入受體細胞（煙草原生質體），C正確；
D、基因工程的最后一步是目的基因的檢測和鑒定，可以用含有除草劑的培養(yǎng)基篩選轉基因煙草細胞，D正確．
故選：BCD．

點評 本題考查基因工程相關知識，包括基因工程的工具、操作步驟等知識點，相關內容不僅需要考生識記，還需要考生理解，特別是A選項，要求考生掌握限制酶的特點，明確限制酶只能切割特定的脫氧核苷酸序列，不能切割核糖核苷酸序列．