Question

【題目】酵母的蛋白質(zhì)含量可達(dá)自身干重的一半，可作為飼料蛋白的來(lái)源。有些酵母可以利用工業(yè)廢甲醇作為碳源進(jìn)行培養(yǎng)，這樣既可減少污染又可降低生產(chǎn)成本。研究人員擬從土壤樣品中分離該類(lèi)酵母，并進(jìn)行大量培養(yǎng)。如圖所示為操作流程，請(qǐng)回答下列問(wèn)題:

（1）配制培養(yǎng)基時(shí)，按照培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱(chēng)量各組分，將其溶解、定容后，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的_________， 及時(shí)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行分裝，并進(jìn)行_________滅菌。

（2）取步驟②中不同梯度的稀釋液加入標(biāo)記好的無(wú)菌培養(yǎng)皿中，在步驟③中，將溫度約_______（填“25℃”、50℃”或“80℃”）的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿混勻，冷凝后倒置培養(yǎng)。

（3）挑取分離平板中長(zhǎng)岀的單菌落，按步驟④所示進(jìn)行劃線(xiàn)。劃線(xiàn)應(yīng)注意的事項(xiàng)有________（答出兩項(xiàng)給分）；步驟⑤中，為使酵母數(shù)量迅速增加，培養(yǎng)過(guò)程中需保證充足的營(yíng)養(yǎng)和_________供應(yīng)。

（4）若要對(duì)酵母細(xì)胞進(jìn)行固定化處理，宜采用_________法，常用的固定化材料是_________， 該方法的優(yōu)點(diǎn)是_________。

Answer 1

【答案】pH 高壓蒸汽 50℃ 為保證無(wú)菌操作，接種環(huán)使用前都必須滅菌；每次劃線(xiàn)結(jié)束后要進(jìn)行灼燒；每一次在上一次劃線(xiàn)結(jié)束處開(kāi)始；劃線(xiàn)時(shí)應(yīng)避免劃破培養(yǎng)基表面，以免不能形成正常菌落等 氧氣 包埋 海藻酸鈉（明膠、瓊脂糖等均可） 成本低，操作更容易（酶活性不易受外界環(huán)境影響）

【解析】

據(jù)圖分析，①稱(chēng)量土樣，里面含有需要分離的酵母菌；②表示梯度稀釋?zhuān)�③④表示平板劃線(xiàn)法，進(jìn)行純化培養(yǎng)；⑥表示擴(kuò)大培養(yǎng)，獲得更多的酵母菌。

（1）配制培養(yǎng)基的操作步驟為稱(chēng)量→溶化→定容→調(diào)pH→分裝→包扎→滅菌→倒平板，因此微生物的培養(yǎng)基配制好后應(yīng)先調(diào) pH，再分裝。常見(jiàn)的滅菌方法有：高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、灼燒滅菌。培養(yǎng)基適宜用高壓蒸汽滅菌法滅菌。

（2）待培養(yǎng)基冷卻到 50℃左右時(shí)倒平板。

（3）在劃線(xiàn)過(guò)程中，接種針、接種環(huán)使用前必須滅菌，以防止雜菌污染培養(yǎng)基；每次劃線(xiàn)結(jié)束后要進(jìn)行灼燒，以清除接種環(huán)上殘留菌種；每一次在上一次劃線(xiàn)結(jié)束處開(kāi)始，為了保證接種環(huán)上的酵母菌來(lái)自于上一次劃線(xiàn)末端，通過(guò)增加劃線(xiàn)次數(shù)使每一次劃線(xiàn)時(shí)的酵母菌數(shù)目逐漸減少，最終得到由單個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的菌落；劃線(xiàn)時(shí)應(yīng)避免劃破培養(yǎng)基表面，大量酵母菌聚集，不能形成正常菌落。酵母菌的代謝類(lèi)型是兼性厭氧型，有氧呼吸可以產(chǎn)生大量能量供酵母菌大量繁殖，所以需供氧使酵母數(shù)量迅速增加。

（4）因?yàn)榧?xì)胞體積較大，宜用包埋法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行固定化處理。常用的固定化材料是海藻 酸鈉、明膠、瓊脂糖等。固定化細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)是成本低，操作容易，酶活性不易受影響等。