Question

4．通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)可將人的α-抗胰蛋白酶基因轉(zhuǎn)入牛的基因組中，并讓它在牛的乳腺細(xì)胞中成功表達(dá)．
（1）為使目的基因能夠在乳腺細(xì)胞中成功表達(dá)，可將目的基因與乳腺蛋白基因啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組，通過(guò)顯微注射法的方法，導(dǎo)入牛的受精卵中．
（2）為檢驗(yàn)?zāi)康幕�因是否已成功�?dǎo)入受體細(xì)胞并整合到基因組中，可用被標(biāo)記的目的基因作為探針，通過(guò)DNA分子雜交技術(shù)進(jìn)行檢驗(yàn)．
（3）成功導(dǎo)入目的基因的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)復(fù)雜的培養(yǎng)才能發(fā)育為轉(zhuǎn)基因個(gè)體，此過(guò)程涉及的技術(shù)主要有動(dòng)物胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等．
（4）要分離牛的血紅蛋白，需將經(jīng)過(guò)抗凝處理的牛血經(jīng)低速短時(shí)離心后，再加生理鹽水洗滌．在凝膠色譜法分離時(shí)，先被洗脫的是大（大或�。┓肿樱�

Answer 1

分析 1、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的原理是凝膠色譜法是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小來(lái)分離蛋白質(zhì)的有效方法，相對(duì)分子質(zhì)量小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程長(zhǎng)，移動(dòng)的速度慢；相對(duì)分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)不容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程短，移動(dòng)的速度快，因此相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)得以分離．

解答 解：（1）要使目的基因在乳腺細(xì)胞中表達(dá)，構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)要將目的基因與乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子、標(biāo)記基因和終止子等調(diào)控組件重組在一起，通過(guò)顯微注射法的方法，導(dǎo)入牛的受精卵中．
（2）為檢驗(yàn)?zāi)康幕�因是否已成功�?dǎo)入受體細(xì)胞并整合到基因組中，可用被標(biāo)記的目的基因作為探針，通過(guò)DNA分子雜交技術(shù)進(jìn)行檢驗(yàn)．
（3）成功導(dǎo)入目的基因的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)動(dòng)物胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等復(fù)雜的培養(yǎng)過(guò)程才能發(fā)育為轉(zhuǎn)基因個(gè)體．
（4）要分離牛的血紅蛋白，需將經(jīng)過(guò)抗凝處理的牛血經(jīng)低速短時(shí)離心后，再加生理鹽水洗滌．在凝膠色譜法分離時(shí)，先被洗脫的是大分子，不容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程短，移動(dòng)的速度快．
故答案為：
（1）乳腺蛋白基因啟動(dòng)子 顯微注射法 受精卵
（2）被標(biāo)記的目的基因（單鏈） DNA分子雜交
（3）動(dòng)物胚胎培養(yǎng) 胚胎移植
（4）低速短時(shí) 大

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合轉(zhuǎn)基因動(dòng)物培育流程圖，考查基因工程的原理及技術(shù)，要求考生識(shí)記基因工程的操作步驟，掌握各步驟中的相關(guān)細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．