回答下列有關(guān)遺傳信息傳遞和表達(dá)的問(wèn)題.
多聚半乳糖醛酸酶(PG)能降解果膠使細(xì)胞壁破損.番茄果實(shí)成熟中,PG合成顯著增加,能使果實(shí)變紅變軟,但不利于保鮮.利用基因工程的方法減少PG基因的表達(dá),可延長(zhǎng)果實(shí)保質(zhì)期.科學(xué)家將PG基因反向接到Ti質(zhì)粒上,導(dǎo)入到番茄細(xì)胞中,得到轉(zhuǎn)基因番茄,過(guò)程如圖1所示.
(1)提取目的基因時(shí),若已獲取PG的mRNA,可通過(guò)
獲取PG基因.在該基因上添加結(jié)構(gòu)A可確;虮磉_(dá),在結(jié)構(gòu)A上應(yīng)具有
的結(jié)合位點(diǎn).
(2)得到的目的基因兩側(cè)需人工合成BamHI單鏈末端.已知BamHI的識(shí)別序列如圖2-甲所示,在圖2-乙相應(yīng)位置上,畫出目的基因兩側(cè)的單鏈末端
.
(3)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中的目的是
.
(4)用含目的基因的農(nóng)桿菌感染番茄原生質(zhì)體后,可用含有
的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選.培養(yǎng)24~48h后取樣,在質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25%的蔗糖溶液中,觀察細(xì)胞
現(xiàn)象來(lái)鑒別細(xì)胞壁是否再生.
(5)由于導(dǎo)入的目的基因能轉(zhuǎn)錄反義RNA,其能與
互補(bǔ)結(jié)合,抑制PG基因的正常表達(dá).若轉(zhuǎn)基因番茄的保質(zhì)期比非轉(zhuǎn)基因番茄
,則可確定轉(zhuǎn)基因番茄成功.
(6)獲得的轉(zhuǎn)基因番茄產(chǎn)生的種子不一定保留目的基因,科研人員常采用
方法使子代保持轉(zhuǎn)基因的優(yōu)良性狀.