圖甲、乙中的箭頭表示三種限制性核酸內切酶的酶切位點，ampr表示氨芐青霉素抗性基因，neo表示新霉素抗性基因。下列敘述正確的是(??? )

A．圖甲中的質粒用BamHⅠ切割后，含有4個游離的磷酸基團

B．在構建重組質粒時，可用PstⅠ和BamHⅠ切割質粒和外源DNA

C．用PstⅠ和HindⅢ酶切，加入DNA連接酶后可得到1種符合要求的重組質粒

D．導入目的基因的大腸桿菌可在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基中生長

質粒是常用的基因工程載體。下圖是某種天然土壤農(nóng)桿菌Ti質粒結構示意圖(標示了部分基因及部分限制酶的作用位點)，據(jù)圖分析下列說法正確的是(??? )

A．圖中的終止子是由三個相鄰堿基組成的終止密碼

B．用農(nóng)桿菌轉化法可將該質粒構建的表達載體導入動物細胞

C．用限制酶Ⅰ和DNA連接酶改造后的質粒無法被限制酶Ⅱ切割

D．用限制酶Ⅱ處理能防止該質粒構建的表達載體引起植物瘋長

如圖表示利用棉花葉肉細胞進行原生質體培養(yǎng)的過程，據(jù)圖分析不正確的是(??? )

A．①過程是在0.5～0.6 mol/L的甘露醇溶液環(huán)境下用纖維素酶和果膠酶處理

B．②過程表示原生質體在培養(yǎng)基提供的特定條件下形成愈傷組織，此過程叫做再分化

C．③過程中以適當配比的營養(yǎng)物質和生長調節(jié)劑進行誘導

D．該過程體現(xiàn)了植物細胞的全能性

某研究小組為測定藥物對體外培養(yǎng)細胞的毒性，準備對某種動物的肝腫瘤細胞(甲)和正常肝細胞(乙)進行細胞培養(yǎng)。下列說法正確的是(??? )

A．在利用兩種肝組織塊制備肝細胞懸液時，也可用胃蛋白酶處理

B．細胞培養(yǎng)應在含5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中進行，CO2的作用是刺激細胞呼吸

C．甲、乙細胞在持續(xù)的培養(yǎng)過程中，乙會出現(xiàn)停止增殖的現(xiàn)象

D．僅用培養(yǎng)肝細胞的培養(yǎng)液也能用來培養(yǎng)乙肝病毒

關于動物細胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)的敘述，錯誤的是(??? )

A．動物細胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)所用培養(yǎng)基不同

B．動物細胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)過程中都要用到胰蛋白酶

C．煙草葉片離體培養(yǎng)能產(chǎn)生新個體，小鼠雜交瘤細胞可離體培養(yǎng)增殖

D．動物細胞培養(yǎng)可用于檢測有毒物質，莖尖培養(yǎng)可用于植物脫除病毒

如圖是單克隆抗體制備流程的簡明示意圖。下列有關敘述正確的是(??? )

A．①是從已免疫的小鼠脾臟中獲得的效應T淋巴細胞

B．②中使用胰蛋白酶有利于雜交瘤細胞的形成

C．③同時具有脾臟細胞和鼠骨髓瘤細胞的特性

D．④是經(jīng)篩選培養(yǎng)獲得的能分泌特異性抗體的細胞群

科學家將人的生長激素基因與大腸桿菌的DNA分子進行重組，并成功地在大腸桿菌中得以表達。但在進行基因工程的操作過程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和質粒，便于重組和篩選。已知限制酶Ⅰ的識別序列和切點是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的識別序列和切點是—↓GATC—，請據(jù)圖回答：

(1)過程①所需要的酶是________。

(2)在構建基因表達載體的過程中，應用限制酶______切割質粒，用限制酶______切割目的基因。用限制酶切割目的基因和載體后形成的黏性末端通過__________________原則進行連接。人的基因之所以能與大腸桿菌的DNA分子進行重組，原因是

________________________________________________________________________。

(3)在過程③中一般將受體大腸桿菌用________________進行處理，以增大____________的通透性，使含有目的基因的重組質粒容易進入受體細胞。

(4)將得到的大腸桿菌B涂布在一個含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上，得到如圖a所示的結果(圓點表示菌落)，該結果說明能夠生長的大腸桿菌中已導入了____________________，反之則沒有導入；再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基a上，使絨布表面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖b所示的結果(圓圈表示與圖a中培養(yǎng)基上對照無菌落的位置)。與圖b圓圈相對應的圖a中的菌落表現(xiàn)型是__________________________，這些大腸桿菌中導入了________________。

(5)人體的生長激素基因能在大腸桿菌體內成功表達是因為______________________。目的基因導入大腸桿菌中后表達的過程是______________________________________。

植物組織培養(yǎng)是克隆植物的一種方法，其過程如圖所示，據(jù)圖回答下列問題。

(1)為了獲得脫毒植株，外植體往往取自植物的花芽、葉芽等處的分生組織，其原因是

________________________________________________________________________

________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

(2)培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基中除需添加營養(yǎng)物質外，還需要添加植物激素，其目的是誘導外植體________________。

(3)在生產(chǎn)實踐中為獲得大量的細胞產(chǎn)物，如紫杉醇，可將①______________放入液體培養(yǎng)基中，經(jīng)機械作用分散成單個細胞，制備成細胞懸浮液，再經(jīng)過____________即可獲得大量細胞。

(4)植物組織培養(yǎng)過程需要在植物生長和繁殖的最適條件下進行，否則在光學顯微鏡下可能觀察到細胞的______________________發(fā)生了異常，進而導致植物性狀遺傳不穩(wěn)定甚至出現(xiàn)不育。

(5)植物組織培養(yǎng)技術不僅應用于花卉和果樹的快速大量繁殖以及脫毒植株的獲取，還廣泛應用于______________________、______________、____________等育種過程。

花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病。野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定劑量的紫外線處理黑芥原生質體可使其染色體片段化，并喪失再生能力。再利用此原生質體作為部分遺傳物質的供體與完整的花椰菜原生質體融合，以獲得抗黑腐病雜種植株。流程如下圖：

據(jù)圖回答下列問題：

(1)過程①所需的酶是______________________________________________________。

(2)過程②后，在顯微鏡下觀察融合的活細胞中有供體的________存在，這一特征可作為初步篩選雜種細胞的標志。

(3)原生質體培養(yǎng)液中需要加入適宜濃度的甘露醇以保持一定的滲透壓，其作用是________________。原生質體經(jīng)過________再生，進而分裂和脫分化形成愈傷組織。

(4)若分析再生植株的染色體變異類型，應剪取再生植株和________植株的根尖，通過________、________、染色和制片等過程制成裝片，然后在顯微鏡下觀察比較染色體的形態(tài)和數(shù)目。

下面是將乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg導入巴斯德畢赤酵母菌生產(chǎn)乙肝疫苗的過程及有關資料，請分析回答下列問題。

資料1? 巴斯德畢赤酵母菌是一種甲基營養(yǎng)型酵母菌，能將甲醇作為其唯一碳源，同時AOX1基因也會因受到誘導而表達[5’AOX1和3’AOX1(TT)分別是基因AOX1的啟動子和終止子]。

資料2? 巴斯德畢赤酵母菌體內無天然質粒，所以科學家改造出了圖1所示的pPIC9K質粒用作載體，其與目的基因形成的重組質粒經(jīng)酶切后可以與酵母菌染色體發(fā)生同源重組，將目的基因整合于染色體中以實現(xiàn)表達。

(1)如果要將HBsAg基因和pPIC9K質粒重組，應該在HBsAg基因兩側的A和B位置接上________、_______限制酶識別序列，這樣設計的優(yōu)點是避免質粒和目的基因自身環(huán)化。

(2)酶切獲取HBsAg基因后，需用________將其連接到pPIC9K質粒上，形成重組質粒，并將其導入大腸桿菌以獲取________________。

(3)步驟3中應選用限制酶________來切割重組質粒獲得重組DNA，然后將其導入巴斯德畢赤酵母菌細胞。

(4)為了確認巴斯德畢赤酵母菌轉化是否成功，在培養(yǎng)基中應該加入卡拉霉素以便篩選，轉化后的細胞中是否含有HBsAg基因，可以用__________________方法進行檢測。

(5)轉化的酵母菌在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時間后，需要向其中加入________以維持其生活，同時誘導HBsAg基因表達。

(6)與大腸桿菌等細菌相比，用巴斯德畢赤酵母菌細胞作為基因工程的受體細胞，其優(yōu)點是在蛋白質合成后，細胞可以對其進行________并分泌到細胞外，便于提取。