Question

【題目】在熒光素酶中加入正確的熒光素底物就可以放出熒光。熒光素酶及其合成基因在生物研究中有著廣泛的應(yīng)用。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）熒光素酶基因可以從基因文庫(kù)中獲取，也可以通過(guò)________方法得到，再利用 PCR 技術(shù)擴(kuò)增即可，擴(kuò)增熒光素酶基因利用的原理是__________________。

（2）在基因工程操作過(guò)程中，需要用________酶和________酶構(gòu)建基因表達(dá)載體，基因表達(dá)載體要有________，以便篩選出含有目的基因的受體細(xì)胞。

（3）熒光素酶基因也可以作為目的基因轉(zhuǎn)入某些動(dòng)植物細(xì)胞中表達(dá)產(chǎn)生熒光素酶。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞，目前常用的目的基因載體是農(nóng)桿菌的 Ti 質(zhì)粒，目的基因需插入到該基因載體的________上，然后再轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞中。將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞的技術(shù)中，應(yīng)用最多的是_______。

Answer 1

【答案】人工合成 DNA（雙鏈）復(fù)制 限制 DNA連接 標(biāo)記基因 T-DNA 顯微注射技術(shù)

【解析】

1、基因工程的工具：

（1）限制酶：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂。

（2）DNA連接酶：連接的是兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵。

（3）運(yùn)載體：常用的運(yùn)載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒

2、基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣，將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。

（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）熒光素酶基因?qū)儆谀康幕�因。目的基因可以從基因文�?kù)中獲取，也可以通過(guò)人工合成方法得到，再利用PCR技術(shù)擴(kuò)增即可。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的原理是DNA雙鏈復(fù)制。

（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要用限制酶分別切割目的基因和載體，然后用DNA連接酶進(jìn)行連接，基因表達(dá)載體要有標(biāo)記基因，以便篩選出含有目的基因的受體細(xì)胞。

（3）將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞，目前常用的目的基因載體是農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒，目的基因需插入到該基因載體的T-DNA上，然后再轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞中。將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞的技術(shù)中，應(yīng)用最多的是顯微注射技術(shù)。