Question

下面是將乙肝病毒控制合成的病毒表面主蛋白的基因HBsAg導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌生產(chǎn)乙肝疫苗的過(guò)程及有關(guān)資料，請(qǐng)分析回答下列問(wèn)題。

資料1：巴斯德畢赤酵母菌可用培養(yǎng)基中甲醇作為其生活的唯一碳源，同時(shí)AOX1基因（醇氧化酶基因）受到誘導(dǎo)而表達(dá)，5'AOX1和3'AOXl（TT）是基因AOX1的啟動(dòng)子和終止子，此啟動(dòng)子也能使外源基因高效表達(dá)。

資料2：巴斯德畢赤酵母菌體內(nèi)無(wú)天然質(zhì)粒，下圖為科學(xué)家改造的pPIC9K質(zhì)粒，其與目的基因形成的重組質(zhì)粒在特定部位酶切后形成的重組DNA片段可以整合到酵母菌染色體上，最終實(shí)現(xiàn)目的基因的表達(dá)。

（1）如果要將HBsAg基因和pPIC9K質(zhì)粒重組，應(yīng)該在HBsAg基因兩側(cè)的A和B位置接上_________限制酶識(shí)別序列（SnaB I、Avr II、SacI、Bgl II四種限制酶的識(shí)別序列均不相同），這樣設(shè)計(jì)的優(yōu)點(diǎn)是避免質(zhì)粒和目的基因自身環(huán)化。

（2）酶切獲取HBsA9基因后，需用______________將其連接到pPIC9K質(zhì)粒上，形成重組質(zhì)粒，根據(jù)步驟②可知步驟①將重組質(zhì)粒先導(dǎo)入大腸桿菌的目的是______________。

（3）步驟3中應(yīng)選用限制酶______________來(lái)切割從大腸桿菌分離的重組質(zhì)粒從而獲得圖中所示的重組DNA片段，然后將其導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌細(xì)胞。

（4）為了確認(rèn)巴斯德畢赤酵母菌轉(zhuǎn)化是否成功，在培養(yǎng)基中應(yīng)該加入______________以便篩選。

（5）轉(zhuǎn)化的酵母菌在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時(shí)間后，需要向其中加入______________以維持其生活，同時(shí)誘導(dǎo)HBsA9基因表達(dá)。

（6）與大腸桿菌等細(xì)菌相比，用巴斯德畢赤酵母菌細(xì)胞作為基因工程的受體細(xì)胞，其優(yōu)點(diǎn)是在蛋白質(zhì)合成后，細(xì)胞可以對(duì)其進(jìn)行_______并分泌到細(xì)胞外，便于提取。

（7）培育轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞所利用的遺傳學(xué)原理是______________。

Answer 1