Question

7．人外周血單核細(xì)胞能合成白細(xì)胞介素2（IL-2）．該蛋白可增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，但在體內(nèi)易被降解．研究人員將IL-2基因與人血清白蛋白（HAS）基因拼接成一個(gè)融合基因，在酵母菌中表達(dá)出具有IL-2生理功能、且不易降解的IL-2-HSA融合蛋白．技術(shù)流程如圖．請(qǐng)回答：
（1）圖中③過(guò)程的原料是IL-2的cDNA，表達(dá)載體1中的位點(diǎn)a 應(yīng)為限制酶BglⅡ的識(shí)別位點(diǎn)，才能成功構(gòu)建表達(dá)載體2．
（2）表達(dá)載體2導(dǎo)入酵母菌后，融合基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA中，與IL-2蛋白對(duì)應(yīng)的堿基序列不能含有終止密碼子，才能成功表達(dá)出IL-2-HSA融合蛋白．啟動(dòng)子是識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA．
（3）培養(yǎng)人外周血單核細(xì)胞時(shí)，需要將溫度控制在37℃，此外還需要通入無(wú)菌的95%空氣和5%CO₂  （氣體）．
（4）應(yīng)用抗原抗體雜交技術(shù)可檢測(cè)酵母菌是否表達(dá)出IL-2-HSA融合蛋白．
（5）如果基因表達(dá)載體2導(dǎo)入的是優(yōu)質(zhì)奶牛的受精卵細(xì)胞，經(jīng)胚胎培養(yǎng)后移入受體母牛子宮內(nèi)可以存活的生理學(xué)基礎(chǔ)是母牛子宮對(duì)外來(lái)胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)．

Answer 1

分析 分析題圖：①表示從人的外周學(xué)細(xì)胞去mRNA；②表示以mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA的過(guò)程；③表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程，需要限制酶和DNA連接酶．目的基因IL-2cDNA的兩端的酶切位點(diǎn)分別是EcoRⅠ和BglⅡ，所以表達(dá)載體1也必須有這兩個(gè)酶切位點(diǎn)，而表達(dá)載體1上已有EcoRⅠ，因此位點(diǎn)a應(yīng)含有BglⅡ．

解答 解：（1）PCR是在體外條件下復(fù)制特定DNA片段的技術(shù)，該過(guò)程需要引物、模板和特定的酶，因PCR產(chǎn)物是白細(xì)胞介素2（IL-2），故模板是含有目的基因（IL-2基因）的cDNA．目的基因IL-2cDNA和表達(dá)載體1在構(gòu)建表達(dá)載體2時(shí)需先用限制酶切割讓二者獲得相同的黏性末端，然后在DNA連接酶的作用下重新組合．根據(jù)目的基因IL-2cDNA的兩端的酶切位點(diǎn)分別是EcoRⅠ和BglⅡ，所以表達(dá)載體1也必須有這兩個(gè)酶切位點(diǎn)，而表達(dá)載體1上已有EcoRⅠ，因此位點(diǎn)a應(yīng)含有BglⅡ．
（2）融合基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA中與IL-2蛋白對(duì)應(yīng)的堿基序列中不能含有終止密碼，才能成功表達(dá)出IL-2-HsA融合蛋白．否則HSA蛋白將無(wú)法合成．
（3）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，所需要的條件是：95%空氣和5%CO₂氣體環(huán)境、適宜溫度（37℃）和PH、無(wú)毒無(wú)菌的環(huán)境及合適的營(yíng)養(yǎng)成分，其培養(yǎng)基中通常需加入血清、血漿等一些天然成分．
（4）檢測(cè)酵母菌是否表達(dá)出IL-2-HSA融合蛋白可用抗原抗體雜交技術(shù)．
（5）胚胎移植時(shí)發(fā)情期母牛子宮對(duì)外來(lái)胚胎基本上不發(fā)生避免排異反應(yīng)反應(yīng)，所以胚胎培養(yǎng)后移入受體母牛子宮內(nèi)可以存活．
故答案為：
（1）IL-2的cDNA   a
（2）終止密碼子   
（3）37   無(wú)菌的95%空氣和5%CO₂
（4）抗原抗體雜交
（5）母牛子宮對(duì)外來(lái)胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合流程圖，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的概念、原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能正確分析題圖，再結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．