Question

如圖是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的技術(shù)路線．圖中tet^R表示四環(huán)素抗性基因，amp^R表示氨芐青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直線所示為三種限制酶的酶切位點．

據(jù)圖回答：
（1）獲得人乳鐵蛋白基因的目前常用方法有

 

、利用PCR技術(shù)擴增目的基因和根據(jù)已知蛋白質(zhì)中的氨基酸序列推知基因的脫氧核苷酸序列再進行化學合成．
（2）圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用

 

限制酶同時酶切載體和人乳鐵蛋白基因．篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含

 

的培養(yǎng)基上進行．
（3）人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞中特異性表達時RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點是

 

，其合成的產(chǎn)物是

 

（添具體內(nèi)容）．
（4）為檢測�；�因組中是否含有人乳鐵蛋白基因可采用

 

技術(shù)
（5）①過程的受體若是雙子葉植物和裸子植物，則采用最多的方法是

 

．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：分析題圖：圖示是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的技術(shù)路線，包括基因表達載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)�入受體細胞、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等步驟，其中過程①是將重組質(zhì)粒導入受體細胞；過程②需采用胚胎移植技術(shù)．

解答： 解：（1）獲得人乳鐵蛋白基因的目前常用方法：從基因組文庫中獲取目的基因、利用PCR技術(shù)擴增目的基因和根據(jù)已知蛋白質(zhì)中的氨基酸序列推知基因的脫氧核苷酸序列再進行化學合成．
（2）外源DNA分子上含有限制酶BamHI、HindIII、SmaI的切割位點，其中限制酶SmaI的切割位點位于目的基因上，所以獲取目的基因和構(gòu)建基因表達載體時，應用限制酶HindⅢ和BamHⅠ．用限制酶HindⅢ和BamHⅠ切割質(zhì)粒后，會破壞質(zhì)粒上的四環(huán)素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進行．
（3）能讓目的基因開始表達的是啟動子，啟動子是RNA聚合酶特異性識別和結(jié)合的DNA序列，是基因的一個組成部分，控制基因表達（轉(zhuǎn)錄）的起始時間和表達的程度；其合成的產(chǎn)物是人乳鐵蛋白基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA．
（4）為檢測�；�因組中是否含有人乳鐵蛋白基因可采用DNA分子雜交技術(shù)，一般檢測目的基因是否表達里用抗原-抗體雜交的方法．
（5）過程①是將重組質(zhì)粒導入受體細胞，受體若是雙子葉植物和裸子植物，則采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
故答案為：
（1）從基因組文庫中獲取目的基因
（2）HindⅢ和BamHⅠ氨芐青霉素
（3）啟動子人乳鐵蛋白基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA
（4）DNA分子雜交
（5）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

點評：本題難度適中，屬于考綱中識記、理解層次的要求，著重考查了基因工程的限制酶的作用特點、啟動子的功能、目的基因?qū)�入植物細胞的方法等相關(guān)知識，要求考生具有一定的識圖能力，并能識記相關(guān)基礎(chǔ)知識．