Question

【題目】欲測定新鮮綠葉中葉綠素a和葉綠素b的含量，可通過測定色素提取液的光密度值（OD值，各吸光物質的總OD值），再根據(jù)以下公式計算：

葉綠素a濃度=12.72D665-2.59D649；葉綠素b濃度=20.13D649-5.03D665（D665、D649表示光程為lcm、波長分別為665nm、649nm所測得的OD值）。

儀器與用具：OD值測定儀一套、天平、研缽、25mL容量瓶、漏斗、濾紙、95%乙醇、石英砂、碳酸鈣等。

（1）完善實驗步驟：

①取材：取新鮮植物葉片，擦凈，剪碎（去掉中脈），混勻。

②研磨：稱取剪碎的新鮮樣品0.2g，放入研缽中，加少量石英砂和碳酸鈣及2~3mL95%乙醇，充分、迅速研磨成____________，再加乙醇10mL，繼續(xù)研磨至組織變白，并靜置3~5min。

③過濾：在漏斗中放置濾紙，用乙醇濕潤，把研磨液沿玻棒倒入漏斗，過濾到25mL棕色容量瓶中，然后用少量95%乙醇沖洗研棒、玻棒、___________及__________數(shù)次，洗滌液一并倒入漏斗中過濾，再用95%乙醇，將漏斗中色素全部洗入容量瓶，直至濾紙和殘渣變白為止。最后定容至25mL。

④測定：把色素提取液搖勻，倒入____________內，以___________為空白對照，在光波長665nm、649nm條件下分別測定OD值。

⑤計算。

（2）實驗

①過濾和定容選擇的容量瓶為“棕色”的目的是為了防止____________。在測定葉綠素OD值時，選擇波長為665nm、649m的紅光，以防類胡蘿卜素的干擾，其原因是_____________。

②本實驗中，____________（需要/不需要）先作葉綠素a、b的標準曲線用于獲得濃度值。

③若實驗中過濾液較渾濁，則測得葉綠素含量將____________（偏大/不影響/偏�。�。

④若根據(jù)實驗結果計算得到葉綠素a和葉綠素b的濃度分別為Ca、Cb（單位mg/L），則待測植物新鮮葉片中葉綠素的含量是_____________mg/g（用Ca、Cb表示）。

Answer 1

【答案】勻漿 研缽 殘渣 光程lcm的比色杯 95%乙醇 葉綠素（被光照）分解 類胡蘿卜素不吸收紅光 不需要 偏大 （Ca+Cb）/8

【解析】

1、葉綠體色素提取的原理：葉綠體中的色素能夠溶解在有機溶劑，所以，可以在葉片被磨碎以后用乙醇提取葉綠體中的色素。

2、色素分離原理：葉綠體中的色素在層析液中的溶解度不同，溶解度高的隨層析液在濾紙上擴散得快，溶解度低的隨層析液在濾紙上擴散得慢。根據(jù)這個原理就可以將葉綠體中不同的色素分離開來。

（1）完善實驗步驟：

②在提取色素時，加入石英砂和碳酸鈣及2~3mL95%乙醇，充分、迅速研磨成勻漿。

③為了獲得更多的色素，需要用少量95%乙醇沖洗研棒、玻棒、研缽和殘渣，最后定容至25mL。

④該實驗測定色素含量的方法是分光光度法，所以需要將色素溶液倒入光程lcm的比色杯，以溶劑（95%乙醇）為空白對照，測定OD值。

（2）實驗

①葉綠素在光照條件下會分解，所以選擇的容量瓶為“棕色”的目的是為了防止葉綠素被光照分解。類胡蘿卜素不吸收紅光，吸收藍紫光，所以選擇波長為665nm、649m的紅光，以防類胡蘿卜素的干擾。

②由于在題干中已經給出了葉綠素的計算公式，所以不需要作標準曲線。

③如果濾液渾濁，對光的吸收值（OD）增大，根據(jù)計算公式，葉綠素含量將會偏大。

（4）計算數(shù)據(jù)葉綠素a和葉綠素b的總濃度時（Ca+Cb）mg/L，所以25mL的總量為，這個數(shù)據(jù)是0.2g葉片中測得的數(shù)據(jù)，所以每克葉片含的葉綠素為mg。