Question

【題目】如圖為某種質粒表達載體簡圖，小箭頭所指分別為限制性內切酶 EcoRI、 BamHI、SamI的酶切位點，P為啟動子，T為終止子，ori為復制原點，已知目的基因的兩端分別有包括coRI、 BamHI、SamI在內的多種酶的酶切位點。外源DNA插入到或中會導致相應的基因失活（表示氨芐青霉素抗性基因，表示四環(huán)素抗性基因）�；卮鹣铝袉栴}：

（1）基因工程中獲取目的基因常用的方法有_______________________（答出兩點即可）。

（2）在基因工程中使用的載體除質粒外，還有__________、__________等。構建重組質粒時，為避免出現(xiàn)自身環(huán)化，通常選用____________酶對該質粒和目的基因進行切割，質粒被切割后斷開了_________個磷酸二酯鍵。被切割后的質粒和目的基因經(jīng)DNA連接酶連接后首先導入大腸桿菌中，為了篩選出含質粒的大腸桿菌，一般需要用含_____________的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。

（3）將含有目的基因的重組質粒導入植物細胞最常用的方法是__________，為檢測目的基因是否在受體細胞中表達，通常選用____________的方法進行分子水平的檢測，此外有時還需要進行___________的鑒定。

Answer 1

【答案】從自然界已有物種中分離、人工的方法合成（或從基因文庫中獲取目的基因、利用PCR技術擴增目的基因、直接人工合成） 噬菌體的衍生物 動植物病毒 4（個） 氨芐青霉素 農(nóng)桿菌轉化法 抗原-抗體雜交 個體生物學水平

【解析】

在基因工程中，一般需要用同一種限制酶切割目的基因和質粒，而圖中的質粒上存在三種限制酶的切割位點，其中兩種限制酶切割位點均在四環(huán)素抗性基因，解答本題應著重圍繞這兩點有效信息。

（1）基因工程中獲取目的基因常用的方法有從自然界已有物種中分離、人工的方法合成（或從基因文庫中獲取目的基因、利用PCR技術擴增目的基因、直接人工合成）。

（2）基因工程中常用的載體是質粒，除質粒外還有噬菌體的衍生物、動植物病毒都可作為載體。為避免出現(xiàn)自身環(huán)化應選擇的限制酶是EcoRI、BamHI，質粒被切割后斷開4個磷酸二酯鍵，由于四環(huán)素基因被破壞，所以篩選出含質粒的大腸桿菌，一般需要用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。

（3）基因表達載體導入植物細胞最常用的方法是農(nóng)桿菌轉化法，基因表達的產(chǎn)物是蛋白質，檢測蛋白質的方法是抗原-抗體雜交，另外還需要從個體生物學水平進行鑒定。