Question

【題目】治療糖尿病首先要測定病人的血糖和胰島素濃度。實(shí)驗(yàn)室中一般采用單克隆抗體對胰島素含量進(jìn)行測定。人抗胰島素單克隆抗體的制備過程中，常給小鼠注射物質(zhì)X。請回答下列問題：

（1）對小鼠注射的物質(zhì)X是_________，以便于從小鼠體內(nèi)獲取_________。

（2）誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合時常用的誘導(dǎo)因素有_________。細(xì)胞融合技術(shù)突破了_________的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。

（3）細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)完成后，融合體系中出現(xiàn)了多種類型的細(xì)胞，原因是__________________。未融合的B細(xì)胞經(jīng)過多次傳代培養(yǎng)后都不能存活，原因是_________。

（4）若要大量制備人抗胰島素單克隆抗體，可將獲得的雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠的_________中使其增殖，再從_________中提取、純化獲得。

Answer 1

【答案】人的胰島素 相應(yīng)的B細(xì)胞 聚乙二醇（PEG）、電剌激和滅活的病毒 有性雜交 細(xì)胞融合是隨機(jī)的，且不能全部融合 B細(xì)胞不能無限增殖 腹腔 腹水

【解析】

1、抗體：一個B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體，從血清中分離出的抗體產(chǎn)量低、純度低、特異性差。
2、單克隆抗體的制備
（1）制備產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞：向免疫小鼠體內(nèi)注射特定的抗原，然后從小鼠脾內(nèi)獲得相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞；

（2）獲得雜交瘤細(xì)胞：
①將鼠的骨髓瘤細(xì)胞與脾細(xì)胞中形成的B淋巴細(xì)胞融合；
②用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，該雜種細(xì)胞既能夠增殖又能產(chǎn)生抗體。
（3）克隆化培養(yǎng)和抗體檢測；
（4）將雜交瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖；
（5）提取單克隆抗體：從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠的腹水中提取。
3、單克隆抗體的應(yīng)用
（1）作為診斷試劑，具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速的優(yōu)點(diǎn)；
（2）用于治療疾病和運(yùn)載藥物。

（1）胰島素單克隆抗體制備，首先需要將人胰島素作為抗原注射到健康成熟小鼠體內(nèi)，故對小鼠注射的物質(zhì)X是是人胰島素；其目的是獲取能分泌抗人胰島素抗體的B細(xì)胞，以便于從小鼠體內(nèi)獲取相應(yīng)的B細(xì)胞。

（2）誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合時常用的誘導(dǎo)因素有聚乙二醇（PEG）、電剌激和滅活的病毒等；細(xì)胞融合技術(shù)使不同物種之間實(shí)現(xiàn)雜交，有性雜交的局限被突破，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。

（3）由于細(xì)胞融合是隨機(jī)的，且不能全部融合，所以細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)完成后，融合體系中出現(xiàn)了多種類型的細(xì)胞；因?yàn)槲慈诤系腂細(xì)胞不能無限增殖，只能分裂50-60次左右，所以未融合的B細(xì)胞經(jīng)過多次傳代培養(yǎng)后都不能存活。

（4）若要大量制備人抗胰島素單克隆抗體，會將雜交瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖，再從小鼠的腹水中提取分離，純化獲得單克隆抗體。