Question

【題目】【生物——選修3：現(xiàn)代生物科技專題】

神經(jīng)營養(yǎng)因子（NTF）能促進(jìn)神經(jīng)元的存活和再生。已知NTF基因能得到克隆。回答下列問題：

（1）在體外，可通過PCR技術(shù)擴(kuò)增NTF基因，該技術(shù)依據(jù)的原理是______________。為何保證PCR反應(yīng)的進(jìn)行，反應(yīng)體系需要加入______________酶、模板DNA、dCTP、dATP、dGTP、dTTP、______________等。在打開DNA雙鏈時需要_______________________。

（2）將外源NTF基因?qū)�入受體細(xì)胞常用的方法是_____________，檢測其是否已表達(dá)，可采用______________方法。

（3）與轉(zhuǎn)基因工程菌相比，利用真核細(xì)胞作為受體得到的NTF才有生物活性，其原因可能是______________。

Answer 1

【答案】 DNA雙鏈復(fù)制 Taq（熱穩(wěn)定DNA聚合） 引物 提高溫度（高溫90—95℃等合理答案） 顯微注射法 抗原—抗體雜交法 NTF合成后需要經(jīng)過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體的加工才具備生物活性

【解析】試題分析：目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。

（1）PCR技術(shù)依據(jù)的原理是DNA雙鏈復(fù)制．為了保證PCR反應(yīng)的進(jìn)行，反應(yīng)體系需要加入耐高溫Taq（DNA聚合）酶、模板DNA、dCTP、dATP、dGTP、dTTP、引物等，PCR技術(shù)不要加解旋酶，提高溫度時，DNA雙鏈就能打開。

（2）將外源NTF基因導(dǎo)入受體細(xì)胞常用的方法是顯微注射法，檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)即是否表達(dá)，可以利用抗原-抗體雜交技術(shù)來檢測。

（3）原核細(xì)胞只有核糖體，沒有其它細(xì)胞器，因此與轉(zhuǎn)基因工程菌（大腸桿菌）相比，利用真核細(xì)胞作為受體得到的NTF才有生物活性，原因是NTF合成后需要經(jīng)過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體的加工才具備生物活性。