Question

【題目】家蠶細(xì)胞具有高效表達(dá)外源基因的能力。將人干擾素基因?qū)�入家蠶細(xì)胞并大規(guī)模培養(yǎng)，可提取干擾素用于制藥。

（1）進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作前，需用__________________酶短時(shí)處理幼蠶組織，以便獲得單個(gè)細(xì)胞作為受體細(xì)胞。

（2）若需在短時(shí)間內(nèi)獲得較多的外源基因，通常采用________技術(shù)。該技術(shù)的反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)包含：引物、模板DNA、_______________和____________。其反應(yīng)過(guò)程中引物與模板DNA鏈結(jié)合依靠___________________________原則完成。

（3）為使干擾素基因在家蠶細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來(lái)自基因文庫(kù)的干擾素基因片段正確插入表達(dá)載體的__________和__________之間。

（4）檢測(cè)人干擾素基因是否已整合到了家蠶細(xì)胞的染色體上，可采用_____________________技術(shù)。

（5）利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)家蠶細(xì)胞時(shí)，貼壁分裂增殖的細(xì)胞會(huì)表現(xiàn)出__________________現(xiàn)象，進(jìn)而停止分裂增殖。此時(shí)，瓶壁上形成的細(xì)胞層數(shù)是________________。

Answer 1

【答案】 胰蛋白酶（或膠原蛋白酶） PCR（或多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)） 熱穩(wěn)定DNA聚合酶（或Taq酶） 4種脫氧核苷酸 堿基互補(bǔ)配對(duì) 啟動(dòng)子 終止子 DNA分子雜交 接觸抑制 1層（或單層）

【解析】本題考查動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)和基因工程的知識(shí)，要求考生能把握動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的原理和操作要點(diǎn)，理解基因工程的基本操作程序，把握每一步操作的要點(diǎn)及依據(jù)，分析基因過(guò)程原理在具體實(shí)踐中的應(yīng)用，本題具有一定的綜合性，但難度一般。

（1）進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作前，可通過(guò)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，用胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）酶短時(shí)處理幼蠶組織，獲得單個(gè)細(xì)胞為基因工程提供受體細(xì)胞。

（2）若需在短時(shí)間內(nèi)獲得較多的外源基因，通常采用PCR（或多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)；該技術(shù)的反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)包含引物、模板DNA、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（或Taq酶）和4種脫氧核苷酸；其反應(yīng)過(guò)程中引物與模板DNA鏈結(jié)合依靠堿基互補(bǔ)配對(duì)原則完成。

（3）該基因工程中，構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要把來(lái)自基因文庫(kù)的干擾素基因片段正確插入表達(dá)載體的啟動(dòng)子和終止子之間，才能使干擾素基因在家蠶細(xì)胞中高效表達(dá)。

（4）檢測(cè)人干擾素基因是否已整合到了家蠶細(xì)胞的染色體上，可采用DNA分子雜交技術(shù)，若檢測(cè)出雜交帶，則表明目的基因已經(jīng)成功導(dǎo)入受體細(xì)胞。

（5）利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)家蠶細(xì)胞時(shí)，貼壁分裂增殖的細(xì)胞增值到一定數(shù)量，會(huì)表現(xiàn)出接觸抑制現(xiàn)象，進(jìn)而停止分裂增殖，此時(shí)瓶壁上形成的細(xì)胞層數(shù)是1層（或單層）。