【題目】人體內的t-PA蛋白能高效降解由血纖維蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和腦血栓的急救藥。

（1）為心�；颊咦⑸浯髣┝康幕蚬こ�t-PA會誘發(fā)顱內出血。研究證實，將t-PA第84位的半胱氨酸換成絲氨酸，能顯著降低出血副作用。據(jù)此，先對天然的t-PA基因進行改造，再采取傳統(tǒng)的基因工程方法表達該突變基因，可制造出性能優(yōu)異的t-PA突變蛋白，該工程技術稱為__________。

（2）若獲得的t-PA突變基因如圖所示，那么質粒pCLY11需用限制酶__________和__________切開，才能與t-PA突變基因高效連接。

（3）將連接好的DNA分子導入大腸杄菌中，對大腸桿菌接種培養(yǎng)。在培養(yǎng)基中除了加入水、碳源、氮源等營養(yǎng)物質外，還應加入__________進行選擇培養(yǎng)，以篩選成功導入pCLY11的細菌。配置好的培養(yǎng)基通常采用__________法進行滅菌。

（4）對培養(yǎng)得到的菌落進行篩選，其中菌落為__________色的即為含t-PA突變基因重組DNA分子的大腸桿菌。得到的大腸桿菌能否分泌t-PA突變蛋白，可通過該細胞產(chǎn)物能否與__________特異性結合進行判定。

【答案】蛋白質工程 XmaI BglII 新霉素 高壓蒸汽滅菌法 白 t-PA蛋白抗體

【解析】

本題考查基因工程和蛋白質工程的相關知識�；蚬こ痰幕静僮鞑襟E：獲取目的基因→構建基因表達載體→導入受體細胞→得到轉基因生物→目的基因檢測與鑒定。蛋白質工程可以通過基因修飾或基因合成，對現(xiàn)有的蛋白質進行改造，或制造新的蛋白質以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求。

（1）對天然的t-PA基因進行改造，以制造出性能優(yōu)異的t-PA突變蛋白的技術稱為蛋白質工程；

（2）如圖所示，由于目的基因的兩端的堿基序列分別是CCGG、CTAG ，所以應用XmaI和BglII兩種限制酶切割，以便于把目的基因連接到質粒pCLY11上；

（3）由圖1可知，將連接好的DNA分子導入大腸桿菌中，含t-PA突變基因重組DNA分子的細胞具有新霉素抗性，在培養(yǎng)基中應加入新霉素進行選擇培養(yǎng)，以篩選成功導入pCLY11的細菌。配置好的培養(yǎng)基通常采用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌；

（4）由于限制酶切割質粒破壞了mlacZ基因，所以含t-PA突變基因重組DNA分子的細胞所長成的菌落呈白色。檢查t-PA突變蛋白可用t-PA抗體，觀察能否發(fā)生特異性結合進行判定。

練習冊系列答案
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【題目】某科研小組以蠶豆根尖為材料，采用微核實驗（檢測細胞染色體或有絲分裂損傷的一種遺傳毒性試驗方法），對吲哚乙酸的遺傳毒性進行了研究，遺傳毒性可以用有絲分裂數(shù)指數(shù)（MI%）（MI%=分裂細胞數(shù)/觀察細胞總數(shù)100%）表示。現(xiàn)用吲哚乙酸處理蠶豆6h、12h、24h，測定結果如圖。下列相關敘述錯誤的是（ ）

A.吲哚乙酸是一種具有調節(jié)作用的蛋白質

B.吲哚乙酸對蠶豆根的遺傳毒性具有兩重性

C.在一定范圍內，不同濃度處理24h時所造成的影響顯著高于6h

D.細胞內染色體的存在狀態(tài)可作為判斷有絲分裂各時期的依據(jù)

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【題目】氨基丁酸作為哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛分布的神經(jīng)遞質，在控制疼痛方面的作用不容忽視．其作用機理如下圖所示。請回答下列有關問題：

（1）氨基丁酸在突觸前神經(jīng)細胞內合成后，可能需要經(jīng)_______才能與突觸小體膜(突觸前膜)融合并分泌出去。當興奮抵達神經(jīng)末梢時氨基丁酸釋放，并與位于圖中突觸后膜上的____________結合后，通道開啟，使氯離子內流，從而抑制突觸后神經(jīng)細胞 ____________(填“靜息、電位”或“動作電位”)的產(chǎn)生。

（2）人體注射麻醉劑后，麻醉劑起到了與____ ( 填物質名稱)一樣的功能，從而可 ____________(填縮短或延長)氯離子通道打開的持續(xù)時間，產(chǎn)生麻醉效果。

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【題目】同位素示蹤法能有效的追蹤物質的運行和變化規(guī)律，該方法的使用，使人們更加深入的了解了葉綠體中發(fā)生的光合作用過程�；卮鹣铝袉栴}：

（1）給小球藻提供C18O2和H2O，一段時間后，釋放的氧氣中含有18O。氧氣中含有18O是由于____________。

（2）卡爾文利用同位素示蹤法進行了如下實驗，以14CO2作為小球藻光合作用的原料，通過不斷縮短用煮沸的甲醇殺死小球藻的時間，再將提取物經(jīng)過紙層析法進行____________，根據(jù)____________，推測出了C的轉移過程。

反應時間

帶14C標記的化合物

30s

多種

5s

14C3，14C5，14C6

<1s

90%14C3

（3）在此實驗之后，卡爾文通過類似的實驗方法進一步找出了與CO2反應的物質，請根據(jù)暗反應中物質的變化規(guī)律，推測出卡爾文所用的實驗方案__________（簡要寫出實驗思路即可）。

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【題目】目前廣泛應用的新型冠狀病毒檢測方法是實時熒光RT-PCR技術。RT—PCR是將RNA逆轉錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈式擴增反應相結合的技術，具體過程如圖所示，下列說法不正確的是（ ）

A.引物A與引物B應該具有不同的堿基序列

B.過程Ⅱ通過控制溫度的變化實現(xiàn)目標序列的循環(huán)擴增

C.該反應體系中應加入緩沖液、引物、四種核糖核苷酸、逆轉錄酶、Taq酶等物質

D.該檢測方法的應用依賴于新型冠狀病毒特異性序列的確定

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【題目】將不含IAA的瓊脂塊a和含有適宜濃度IAA的瓊脂塊aˊ分別放在去尖端的玉米胚芽鞘切段上。給予放置aˊ的胚芽鞘單側光照射，發(fā)現(xiàn)胚芽鞘彎曲生長，結果如下圖。下列敘述正確的是（ ）

A.該實驗體現(xiàn)了IAA作用的兩重性

B.dˊ上IAA量小于aˊ的原有的IAA量

C.aˊ的胚芽鞘彎曲生長體現(xiàn)植物向光性

D.胚芽鞘bˊ側細胞能運輸IAA而cˊ側細胞不能

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【題目】下圖是人體某組織內環(huán)境示意圖。A、B、C是液體，1、2是不同的結構，3是組織細胞。以下敘述中正確的是

A. 花粉過敏會引起A增多

B. 2處細胞直接的內環(huán)境為B

C. 機體新陳代謝主要在C中進行

D. A中的O2進入3中被利用至少要通過5層生物膜

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【題目】研究發(fā)現(xiàn)，當果蠅的一條常染色體上的隱性基因t純合時，雌蠅即轉化為不育的雄蠅。現(xiàn)將基因t位點雜合的雌蠅與純合隱性雄蠅作為親本雜交，則理論上性別比例（♂∶♀）是（ ）

A.9∶7B.3∶1C.13∶3D.11∶5

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【題目】某生物小組的同學用如圖所示的裝置培養(yǎng)乳酸菌。請回答下列問題：

（1）實驗室中可用番茄汁來培養(yǎng)微生物。將番茄汁過濾并進行______________處理，冷卻后接種乳酸菌。番茄汁為乳酸菌提供的基本營養(yǎng)物質有____________________________。向培養(yǎng)基中加入的瓊脂的作用是____________________________。

（2）密封玻璃罐前先將蠟燭點燃，原因是____________________________。

（3）研究小組篩選了2種可在pH=3.0條件下生長的乳酸菌菌株進行產(chǎn)酸能力研究，并提取發(fā)酵液研究了這2種乳酸菌對金黃色葡萄球菌的抑制作用，實驗結果見下表：

編號

pH

酸度（0T）

抑菌圈直徑（mm）

菌株DJ3

3.69

179.1

21.33

菌株DJ4

4.30

109.7

17.72

乳酸溶液

3.70

176.4

17.92

乳酸溶液

4.31

109.5

15.69

空白對照

6.60

15.4

8.64

產(chǎn)酸能力較強的菌株是______________，根據(jù)實驗數(shù)據(jù)分析，乳酸菌發(fā)酵液的抑菌機制可能是____________________________。

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