Question

【題目】20世紀以來，生物工程迅猛發(fā)展，人們應用生物工程技術已獲得了多種需要的生物新品種或新產品。請據圖回答下列問題：

（1）圖中（I）是______________，在構建重組質粒的過程中，保證（I）與質粒具有相同黏性末端的是酶A、酶B中的_______________。

（2）在將（I）導入受體細胞之前需構建基因表達載體（重組質粒），其目的是使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠______________。如果（II）受體細胞是大腸桿菌細胞，最常用的轉化方法是________________，原理是________________。

（3）（II）、（III）的過程中要對受體細胞進行檢測，目的是判斷目的基因是否可以穩(wěn)定維持和表達其遺傳性狀。若要檢測目的基因是否轉錄出mRNA，可用_______________技術；若要檢測目的基因是否表達出蛋白質，可用___________________技術。

（4）寫出質粒作為運載體的條件_______________、__________________(兩項）。

Answer 1

【答案】 目的基因 酶A 表達和發(fā)揮作用 Ca離子轉化法 使其成為感受態(tài)細胞，容易吸收外源DNA 分子雜交 抗原—抗體雜交 一個至多個限制酶切位點 有標記基因

【解析】試題分析：根據圖解流程分析可知，酶A為限制酶，識別并切割含目的基因的供體DNA以及質粒，以獲得具有相同黏性末端的目的基因（I）和質粒；酶B為DNA連接酶，將切出的目的基因與質粒重新連接形成重組質粒（II）；再將重組質粒導入受體細胞，得到含轉基因的細胞，最后經過篩選，獲得能穩(wěn)定遺傳并表達的轉基因細胞，經體外培養(yǎng)提取所需的轉基因表達產物。

（1）根據前面的分析可知，圖中（I）是目的基因，在構建重組質粒的過程中，保證（I）與質粒具有相同黏性末端的是酶A——限制酶。

（2）在將目的基因導入受體細胞的關鍵是使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。如果（II）受體細胞是大腸桿菌細胞，最常用的轉化方法是鈣離子轉化法，其原理是利用鈣離子處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細胞，容易吸收外源DNA。

（3）對接受目的基因的受體細胞進行檢測，目的是判斷目的基因是否可以穩(wěn)定維持和表達其遺傳性狀。若要檢測目的基因是否轉錄出mRNA，可用分子雜交技術；若要檢測目的基因是否表達出蛋白質，可用抗原—抗體雜交技術。

（4）質粒作為運載體的條件：一是它含有一個至多個限制酶切位點；二是含有標記基因；三是能在宿主細胞內穩(wěn)定保持和復制；四是對宿主細胞沒有危害性。