Question

科學家發(fā)現(xiàn)家蠅體內存在一種抗腫瘤蛋白（且具有抗菌能力），受到研究者重視．臨床使用發(fā)現(xiàn)此蛋白質對腫瘤確良好的療效，可以通過基因工程技術導入大腸桿菌內進行大量生產．其過程大體如圖所示：
（1）在基因工程中，獲取目的基因的方法有

 

（至少寫出兩種）．
（2）圖中a過程叫

 

，它是基因操作的核心步驟．
（3）將抗腫瘤基因導入大腸桿菌，并在大腸桿菌細胞內成功表達產生了抗腫瘤蛋白，由于

 

，因此在短時間內就能獲得大量的抗腫瘤蛋白．

（4）細胞工程可以作為輔助手段，通過獲得特定的單克隆抗體并與抗腫瘤蛋白結合制成“生物導彈”，以實現(xiàn)“靶向殺癌”．下面是單克隆抗體制備過程示意圖，請據(jù)圖回答：
①圖中A過程從小鼠的脾臟中取得的“小鼠細胞”是

 

細胞，要獲得能產生抗腫瘤蛋白抗體的雜交瘤細胞至少要經過

 

次篩選．從小鼠體內提取分離該細胞之前，給小鼠注射的特定的物質是

 

．
②實驗室無法單獨培養(yǎng)能獲得單克隆抗體的細胞．通過細胞工程獲得的雜交瘤細胞由于具備

 

的優(yōu)點，使單抗技術獲得成功．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術,單克隆抗體的制備過程

專題：

分析：1、基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應，之后從小鼠脾臟中獲取已經免疫的B淋巴細胞；誘導B細胞和骨髓瘤細胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞；進行抗體檢測，篩選出能產生特定抗體的雜交瘤細胞；進行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體．

解答： 解：（1）在基因工程中，獲取目的基因的方法有從基因文庫中獲取目的基因、PCR擴增目的基因、人工合成目的基因．
（2）圖中a為基因表達載體的構建過程，它是基因工程的核心步驟．
（3）選用大腸桿菌作為受體細胞，由于其繁殖速度快、產量較高，因此可以在短時間內獲得要表達的蛋白質．
（4）①單克隆抗體的制備過程中，采用的是已免疫的小鼠B細胞（漿細胞或效應B細胞），即經過注射特異性抗原，然后和骨髓瘤細胞的融合，需要經過至少兩次篩選（第一次篩選獲得雜交瘤細胞，第二次篩選獲得能產生抗體的雜交瘤細胞），最終篩選出來的雜交瘤細胞．
②最終篩選出的雜交瘤細胞既能在體外條件下大量增殖，又能產生特異性抗體．
故答案為：
（1）從基因文庫中獲取目的基因、PCR擴增目的基因、人工合成目的基因
（2）構建基因表達載體
（3）繁殖快、產量較高
（4）①漿（效應B）    2    特異性抗原（或癌細胞）
 ②既能在體外條件下大量增殖，又能產生特異性抗體

點評：本題結合圖解，考查基因工程和細胞工程的相關知識，要求考生識記基因工程的操作步驟，掌握各步驟中需要注意的細節(jié)；識記單克隆抗體的制備過程，能結合圖解準確答題．