Question

【題目】研究人員利用生物工程技術(shù)，探究豬bmp15基因在不同組織細(xì)胞中的特異性表達(dá)．該工程技術(shù)基本流程如圖（EGFP基因控制合成增強(qiáng)型綠色熒光蛋白；過程②表示表達(dá)載體2成功導(dǎo)入各組織細(xì)胞）．請(qǐng)回答：
（1）過程①中，需利用限制酶處理表達(dá)載體1．為了大量獲得豬bmp基因，可用技術(shù)，該技術(shù)需要用到的酶是 ．
（2）目前對(duì)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)條件還沒完全研究清楚，培養(yǎng)受體細(xì)胞時(shí)往往需要添加等天然成分．同時(shí)還需在培養(yǎng)液中添加一定量的 ， 以防污染．
（3）在實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，提取上述豬肌肉細(xì)胞的（mRNA/DNA），利用標(biāo)記的EGFP基因作探針，進(jìn)行分子雜交，可進(jìn)一步探究豬bmp基因特異性表達(dá)的原因．
（4）據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測(cè)，豬bmp15基因在細(xì)胞特異性表達(dá)．

Answer 1

【答案】
（1）XhoI和HindⅢPCR；熱穩(wěn)定；DNA聚合酶（Taq）
（2）血清、血漿；抗生素
（3）mRNA
（4）豬卵巣細(xì)胞
【解析】解：（1）據(jù)圖示可知，切割目的基因時(shí)使用的限制酶XhoⅠ和HindⅢ，構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需用同種限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運(yùn)載體，因此過程①中，需利用XhoⅠ和HindⅢ限制酶處理表達(dá)載體1．PCR技術(shù)可在體外大量擴(kuò)增目的基因，該技術(shù)是在較高溫度下進(jìn)行的，因此需要用到熱穩(wěn)定DNA聚合酶．（2）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，對(duì)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)條件還沒完全研究清楚，因此需要在培養(yǎng)基中加入動(dòng)物血清；培養(yǎng)受體細(xì)胞時(shí)，通常需在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，以防雜菌污染．（3）檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，使用分子雜交技術(shù)．因此，為了進(jìn)一步探究豬bmp基因特異性表達(dá)的原因，可以提取上述豬肌肉細(xì)胞的mRNA利用標(biāo)記的EGFP基因作探針，進(jìn)行分子雜交．（4）據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，只有在豬卵巢細(xì)胞中檢測(cè)出綠色熒光，而豬肌肉細(xì)胞核豬羊水干細(xì)胞中均沒有檢測(cè)出綠色熒光，由此推測(cè)豬bmp15基因在豬卵巢細(xì)胞中特異性表達(dá)． 所以答案是：（1）XhoI和HindⅢPCR；熱穩(wěn)定；DNA聚合酶（Taq）；（2）血清、血漿； 抗生素；（3）mRNA；（4）豬卵巣細(xì)胞
【考點(diǎn)精析】根據(jù)題目的已知條件，利用基因工程的原理及技術(shù)的相關(guān)知識(shí)可以得到問題的答案，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)．