Question

融合PCR技術是采用具有互補末端的引物，將不同來源的擴增片段連接起來的方法，其過程如下圖1所示。下圖2是中間載體1和中間載體2（利用融合PCR技術構建成）構建成葉綠體定點整合表達載體示意圖（限制酶酶切位點標注于載體外側），葉綠體定點整合表達載體通過與葉綠體基因的同源重組，將目的基因整合于葉綠體DNA上的特定位點上。請據圖回答下列問題。

（1）圖1第一階段中PCR至少進行____________次循環(huán)，才能獲得雙鏈等長的DNA，第二階段中引物2與引物3部分堿基的____________關系使得兩DNA能成功“搭橋”連接起來。

（2）若通過融合PCR技術將啟動子、標記基因、目的基因、終止子拼接起來，需要設計__________種引物，其中能夠起著“搭橋”作用的引物有__________種。

（3）圖2中需使用_________________（填限制酶）和DNA連接酶將兩中間載體構建成定點整合表達載體，途中定點整合表達載體上未標出的結構是__________。

（4）葉綠體定點整合表達載體中____________（填基因）能使目的基因準確插入葉綠體DNA上的特定位點上。與利用農桿菌轉化法相比，利用定點整合表達載體將目的基因導入葉綠體中的優(yōu)點是_______。

Answer 1