Question

【題目】高溫淀粉酶在大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中有很大的實用性。研究者從熱泉中篩選了高效產(chǎn)生高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選過程如下圖所示。請分析回答下列問題：

（1）按功能分，Ⅰ號培養(yǎng)基稱為______；該培養(yǎng)基中必須以______作為唯一碳源。過程①②合稱為______，若該過程所得平板上的平均菌落數(shù)為50個，所用稀釋液的體積為0.2mL，稀釋倍數(shù)為105時，則每毫升樣品中的細菌數(shù)約為______個。

（2）對配制的培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌，目的是______。

（3）在1號培養(yǎng)基上挑出能產(chǎn)生淀粉酶的嗜熱菌菌落的鑒別方法是培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的______；也可將得到的菌懸液轉(zhuǎn)接于同時含有葡萄糖和淀粉作碳源的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到若干菌落后用碘液作顯色處理，看到如下圖所示情況，可判斷圖中______的菌落含有所需菌種。

（4）如果高溫淀粉酶的產(chǎn)業(yè)化需要其活性在固定化處理時不受損失，且在多次重復使用后仍能維持穩(wěn)定的酶活性，則應選擇下圖中的______（填寫字母）固定化工藝。

Answer 1

【答案】選擇培養(yǎng)基 淀粉 稀釋涂布平板法 2.5×107 使培養(yǎng)基中所有微生物永遠喪失生長繁殖能力（或殺死培養(yǎng)基中所有的微生物，包括芽孢和孢子或防止雜菌污染） 透明圈 周圍不顯藍色 C

【解析】

本實驗目的是從熱泉中篩選了高效產(chǎn)生高溫淀粉酶的嗜熱菌，因此需要制備以淀粉為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基；圖示可見，①過程是稀釋嗜熱菌培養(yǎng)液的過程，接種嗜熱菌即②過程常用稀釋涂布平板法。培養(yǎng)基配制和滅菌過程中，應注意先調(diào)節(jié)pH，后滅菌，一般培養(yǎng)基滅菌常用高壓蒸汽滅菌法，高壓蒸汽滅菌法是可殺滅包括芽胞在內(nèi)的所有微生物的一種滅菌方法。部分嗜熱菌在Ⅰ培養(yǎng)基上生長時可產(chǎn)生淀粉酶，分解培養(yǎng)基中的淀粉后會在菌落周圍形成透明圈，透明圈越大，說明產(chǎn)生的淀粉酶越多，因此應挑選透明圈大的菌落接種在Ⅱ號培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)。

（1）Ⅰ號培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中必須以淀粉作為唯一碳源。過程①②為稀釋涂布平板法；若平板上的平均菌落數(shù)為50個，所用稀釋液的體積為0.2mL，稀釋倍數(shù)為105時，則每毫升樣品中的細菌數(shù)約為50÷0.2×105=2.5×107個。

（2）對配制的培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌，是為了殺滅包括芽胞在內(nèi)的所有微生物，防止雜菌污染。

（3）1號培養(yǎng)基上的嗜熱菌可產(chǎn)生淀粉酶分解培養(yǎng)基中的淀粉，在菌落周圍形成透明圈；若菌落含有可產(chǎn)淀粉酶的嗜熱菌，淀粉會被分解，加碘液后不顯藍色，因此可判斷圖中周圍不顯藍色的菌落含有所需菌種。

（4）據(jù)圖分析，A是物理吸附法，B是化學結(jié)合法，C是包埋法，由于酶容易從包埋材料中漏出，所以一般不使用包埋法，化學結(jié)合法可能會對酶活性產(chǎn)生影響，想要酶活性在固定化處理時不受損失，且在多次重復使用后仍能維持穩(wěn)定的酶活性，則應選擇圖中的C。