Question

根據(jù)所學(xué)生物學(xué)知識(shí)回答下列問題：
（1）若要將某目的基因通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入植物細(xì)胞，先要將目的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的

 

中，然后用該農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞，通過DNA重組將目的基因插入植物細(xì)胞的

 

上．
（2）目前臨床上使用的紅細(xì)胞生成素（一種糖蛋白，用于治療腎衰性貧血）

 

主要來自基因工程技術(shù)生產(chǎn)的重組人紅細(xì)胞生成素（rhEPO）．檢測(cè)rhEPO的體外活性需用抗rhEPO的單克隆抗體．分泌該單克隆抗體的細(xì)胞，可由rhEPO免疫過的小鼠B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合而成，在融合過程中至少需要進(jìn)行

 

次篩選．
（3）在“試管�！钡呐嘤�過程中，采用激素處理可使良種母牛一次排出多枚卵母細(xì)胞，最常用的激素是

 

．從良種公牛采集的精子需

 

后才能進(jìn)行受精作用；防止多精入卵的兩道屏障依次為

 

、

 

．
（4）生態(tài)系統(tǒng)內(nèi)即使某個(gè)物種由于某種原因而死亡，也會(huì)很快有其他物種占據(jù)它原來的生態(tài)位置，從而避免系統(tǒng)結(jié)構(gòu)或功能失衡．這體現(xiàn)了生態(tài)工程的什么原理

 

A．協(xié)調(diào)與平衡原理      B．物種多樣性原理C．物質(zhì)循環(huán)再生原理  D．整體性原理
（5）下表為幾種限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別的序列和切割的位點(diǎn)．

限制酶	BamHⅠ	EcoRⅠ	PstⅠ
識(shí)別序列和切割位點(diǎn)

如圖，已知某DNA在目的基因的兩端1、2、3、4四處有BamHⅠ或EcoRⅠ或PstⅠ的酶切位點(diǎn)．現(xiàn)用BamHⅠ和PstⅠ兩種酶同時(shí)切割該DNA片段（假設(shè)所用的酶均可將識(shí)別位點(diǎn)完全切開），下列各種酶切位點(diǎn)情況中，可以防止酶切后單個(gè)含目的基因的DNA片段自身連接成環(huán)狀的是

 

．
A．1 為PstⅠ，2為EcoRⅠ，3為EcoRⅠ，4為BamHⅠ
B．1 為EcoRⅠ，2為BamHⅠ，3為BamHⅠ，4為PstⅠ
C．1 為BamHⅠ，2為EcoRⅠ，3為BamHⅠ，4為PstⅠ
D．1 為EcoRⅠ，2為PstⅠ，3為PstⅠ，4為BamHⅠ
（6）運(yùn)用基因工程技術(shù)已經(jīng)創(chuàng)造出了“蜘蛛羊”，該羊的乳汁中含有蛛絲蛋白，高強(qiáng)度的蛛絲蛋白可用于許多重要的特種工業(yè)領(lǐng)域．為保證實(shí)驗(yàn)成功，產(chǎn)生蛛絲蛋白的基因需從cDNA文庫(kù)中獲取，并與

 

等調(diào)控組件重組在一起，然后與載體相連構(gòu)建成為表達(dá)載體；再通過

 

方法，將表達(dá)載體導(dǎo)入羊的

 

，獲得重組細(xì)胞．將獲得的重組細(xì)胞培養(yǎng)成早期胚胎后，移植到經(jīng)過

 

處理的受體母羊子宮內(nèi)．因?yàn)槲覀儗?duì)細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)條件還沒有完全研究清楚，所以在早期胚胎的培養(yǎng)中，往往還需要添加

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù),胚胎移植

專題：

分析：1、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化發(fā)生的原理：農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上．根據(jù)農(nóng)桿菌的這一特點(diǎn)，如果將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上，通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以把目的基因整合到植物細(xì)胞中染色體的DNA上．
2、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測(cè)，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體．
3、受精過程為：頂體反應(yīng)→穿越放射冠→穿越透明帶（透明帶反應(yīng)）→卵細(xì)胞膜反應(yīng)（卵黃膜封閉作用）→卵子完成減數(shù)第二次分裂并釋放第二極體→雌雄原核的形成、核膜消失，雌、雄原核融合形成合子→第一次卵裂開始．

解答： 解：（1）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法是現(xiàn)將目的基因組合到農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA上，然后把重組質(zhì)粒導(dǎo)入到農(nóng)桿菌細(xì)胞中，利用農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞，將目的基因插入植物細(xì)胞的染色體DNA上．
（2）單克隆抗體的制備流程：首先用相應(yīng)的抗原免疫小鼠，從免疫的小鼠的脾臟中提取B淋巴細(xì)胞，與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合，并在特定的選擇培養(yǎng)基上篩選出雜交瘤細(xì)胞，然后在通過克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，用該細(xì)胞進(jìn)行體內(nèi)培養(yǎng)或體外培養(yǎng)獲得單克隆抗體．可見，該過程中進(jìn)行了2次篩選．
（3）給母畜注射促性腺激素可促進(jìn)其超數(shù)排卵；精子獲能后才具備與成熟卵子受精的能力；防止多精受精的兩道屏障：透明帶反應(yīng)、卵黃膜封閉作用．
（4）由“生態(tài)系統(tǒng)內(nèi)即使某個(gè)物種由于某種原因而死亡，也會(huì)很快有其他物種占據(jù)它原來的生態(tài)位置”可知這里主要體現(xiàn)的是物種的多樣性，所以該生態(tài)工程的原理為物種多樣性原理．
（5）A、若1為PstⅠ，2為EcoRⅠ，3為EcoRⅠ，4為BamHⅠ，用BamHⅠ和PstⅠ兩種酶同時(shí)切割該DNA片段，可防止酶切后單個(gè)含目的基因的DNA片段自身連接成環(huán)狀，A正確；
B、若1為EcoRⅠ，2為BamHⅠ，3為BamHⅠ，4為PstⅠ，用BamHⅠ和PstⅠ兩種酶同時(shí)切割該DNA片段，得到目的基因兩側(cè)都有BamHⅠ酶切形成的黏性末端，這樣會(huì)導(dǎo)致酶切后單個(gè)含目的基因的DNA片段自身連接成環(huán)狀，B錯(cuò)誤；
C．若1為BamHⅠ，2為EcoRⅠ，3為BamHⅠ，4為PstⅠ，用BamHⅠ和PstⅠ兩種酶同時(shí)切割該DNA片段，得到目的基因兩側(cè)都有BamHⅠ酶切形成的黏性末端，這樣會(huì)導(dǎo)致酶切后單個(gè)含目的基因的DNA片段自身連接成環(huán)狀，C錯(cuò)誤；
D．若1為EcoRⅠ，2為PstⅠ，3為PstⅠ，4為BamHⅠ，用BamHⅠ和PstⅠ兩種酶同時(shí)切割該DNA片段，得到目的基因兩側(cè)都有PstⅠ酶切形成的黏性末端，這樣會(huì)導(dǎo)致酶切后單個(gè)含目的基因的DNA片段自身連接成環(huán)狀，D錯(cuò)誤．
故選：A．
（6）為了讓目的基因在轉(zhuǎn)基因羊的乳腺細(xì)胞中表達(dá)，需要在重組質(zhì)粒中添加羊的乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子．培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的受體細(xì)胞為受精卵，導(dǎo)入目的基因常用顯微注射法．將獲得的重組細(xì)胞培養(yǎng)成早期胚胎后，移植到經(jīng)過同期發(fā)情處理的受體母羊子宮內(nèi)．因?yàn)槲覀儗?duì)細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)條件還沒有完全研究清楚，所以在早期胚胎培養(yǎng)的培養(yǎng)基中，往往還需要添加動(dòng)物血清．
故答案為：
（1）T-DNA     染色體DNA
（2）雜交瘤2
（3）促性腺激素獲能透明帶反應(yīng)、卵黃膜封閉作用
（4）B   
（5）A
（6）羊的乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子   顯微注射    受精卵   同期發(fā)情   動(dòng)物血清

點(diǎn)評(píng)：本題綜合考查基因工程、細(xì)胞工程、胚胎工程和生態(tài)工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，掌握各步驟中需要注意的細(xì)節(jié)；識(shí)記單克隆抗體的制備工程；識(shí)記胚胎移植的具體工程，能根據(jù)圖中和題干要求答題．