發(fā)光細(xì)菌檢測(cè)法在檢測(cè)生物毒性的方法中具有靈敏、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)而被廣泛采用．
實(shí)驗(yàn)原理：細(xì)菌代謝正常時(shí)，發(fā)光細(xì)菌的發(fā)光強(qiáng)度穩(wěn)定，并可維持較長(zhǎng)時(shí)間；當(dāng)外界環(huán)境影響到發(fā)光細(xì)菌代謝時(shí)，發(fā)光會(huì)立即受到抑制，且抑制程度與影響物質(zhì)濃度大小呈相關(guān)關(guān)系．
實(shí)驗(yàn)材料：明亮發(fā)光桿菌（海水細(xì)菌）、待測(cè)海水水樣、2%的NaCl溶液、3%NaCl溶液、生物毒性測(cè)試儀（用于測(cè)定細(xì)菌發(fā)光強(qiáng)度）、全溫振蕩器、試管等．
Ⅰ．發(fā)光細(xì)菌的培養(yǎng)
發(fā)光細(xì)菌可以直接從海水中和海魚(yú)的體表和內(nèi)臟中分離，所采用的培養(yǎng)基成分為：胰蛋白胨0.5%，酵母膏0.5%，甘油0.3%，KH
2PO
40.1%，Na
2HPO
40.5%，NaCI
3%，瓊脂2%，pH6.5．
（1）發(fā)光細(xì)菌為
（自養(yǎng)型/異養(yǎng)型）．取海魚(yú)內(nèi)臟放入滅菌培養(yǎng)皿中20℃培養(yǎng)12-18小時(shí)，在暗室中尋找發(fā)光點(diǎn)，用
刮取少許菌苔，在
培養(yǎng)基中采用
法獲得純化的發(fā)光菌株．使用前接種到
培養(yǎng)基中20℃下振蕩培養(yǎng)10-12小時(shí)，增殖后用磷酸緩沖液稀釋后備用．
Ⅱ．海水中重金屬污染程度測(cè)定
a、配制發(fā)光菌懸液；
b、抑光反應(yīng)：按照下表配置海水樣品稀釋液；
表1海水中重金屬污染程度測(cè)定
| 試管編號(hào) |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
| 3%NaCl溶液（mL） |
|
4.74 |
4.49 |
4.24 |
3.99 |
| 海水樣品（mL） |
|
0.25 |
0.50 |
0.75 |
1.00 |
| 發(fā)光菌懸液（mL） |
|
0.01 |
0.01 |
0.01 |
0.01 |
| 混合液中海水濃度（%） |
|
0.05 |
0.10 |
0.15 |
0.20 |
（2）表1中1號(hào)試管的作用是
．
（3）請(qǐng)?jiān)诒砀裰刑顚戇m當(dāng)?shù)臄?shù)據(jù)．
（4）利用生物毒性測(cè)試儀測(cè)定各試管的
（測(cè)定指標(biāo)）．
Ⅲ．五氯酚鈉毒性測(cè)定
資料：五氯酚鈉在水中以五氯苯酚陰離子和五氯苯酚分子平衡存在；五氯苯酚比五氯酚鈉的極性小得多，更容易通過(guò)生物膜而與細(xì)菌細(xì)胞相接觸．實(shí)驗(yàn)溫度25℃下，pH為6.0、7.0、8.0、9.0時(shí)，pH每升高1個(gè)單位，分子態(tài)五氯苯酚所占的比例就下降一個(gè)數(shù)量級(jí)．
a、將五氯酚鈉配成5個(gè)左右濃度等級(jí)，將接種后12h的菌液1-2mL用20-30mL3%NaCl溶液稀釋混合，磁力攪拌10min 后，?取0.2mL加入比色管中，上下振蕩5次，去塞，靜置15min后用生物毒性測(cè)試儀測(cè)定發(fā)光強(qiáng)度．
b、計(jì)算相對(duì)發(fā)光率
相對(duì)發(fā)光率（RL）=測(cè)試管發(fā)光量mV/對(duì)照管發(fā)光量mV×100%
計(jì)算對(duì)應(yīng)相對(duì)發(fā)光率減小50%的物質(zhì)濃度（EC50）??
c．不同pH條件下，五氯酚鈉毒性測(cè)定
發(fā)光細(xì)菌適宜生存的pH值為6.0-9.0
?表2 不同pΗ 值下五氯酚鈉毒性測(cè)定結(jié)果/㎎?L
-1
| pΗ |
6.0 |
7.0 |
8.0 |
9.0 |
| EC50值 |
1.74 |
2.41 |
9.39 |
15.94 |
（5）表2的結(jié)果與結(jié)論
．
（6）據(jù)資料分析可能的原因：
．
如圖顯示在某一群落中4種不同種群的生長(zhǎng)情況，種群Ⅳ是一種綠色植物，根據(jù)圖表曲線所提供的信息回答下列問(wèn)題：