Question

【題目】如圖為某種質粒表達載體簡圖，小箭頭所指分別為限制性內切酶EcoRI、BamHI的酶切位點，ampR為青霉素抗性基因，tetR為四環(huán)素抗性基因，P為啟動子，T為終止子，ori為復制原點．已知目的基因的兩端分別包括有EcoRI、BamHI在內的多種酶的酶切位點．據圖回答：
（1）將含有目的基因的DNA與質粒表達載體分別用EcoRI酶切，酶切產物用DNA連接酶進行連接后，其中由兩個DNA片段之間連接形成的產物有：目的基因﹣載體連接物、、三種．圖中ampR和tetR可以作為質粒表達載體的基因，其目的是為了鑒別 ．
（2）目的基因表達時，RNA聚合酶識別和結合的位點是啟動子，其合成的產物是 ．
（3）在上述實驗中，為了防止目的基因和質粒表達載體在酶切后產生的末端發(fā)生任意連接，酶切時應選用的酶是 ．
（4）若用第一小問的3種連接產物與無任何抗藥性的原核宿主細胞進行轉化實驗．之后將這些宿主細胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能生長的原核宿主細胞所含有的連接產物是；若接種到含青霉素的培養(yǎng)基中，能生長的原核宿主細胞所含有的連接產物是 ．

Answer 1

【答案】
（1）載體﹣載體連接物；目的基因﹣目的基因連接物；標記；受體細胞中是否含有目的基因
（2）mRNA
（3）EcoRI和BamHI
（4）載體﹣載體連接物；目的基因﹣載體連接物、載體﹣載體連接物
【解析】解：（1）用EcoRI酶切出的目的基因和質粒具有相同的黏性末端，如果放在一起加入DNA連接酶，則可出現3種連接結果，即目的基因自身連接形成的連接物，載體自身連接形成的連接物和重組質粒，要通過篩選、純化才能選出符合要求的DNA．圖中ampR和tetR可以作為質粒表達載體的標記基因，其目的是為了鑒別受體細胞中是否含有目的基因．（2）載體自身形成的連接物能重新形成完整的tetR基因，具有抗四環(huán)素的特點，其他連接物中tetR基因被限制性內切酶破壞，不再具有抗四環(huán)素的特點；在整個操作過程中，ampR基因保持完整，載體（質粒）自身連接形成的連接物和目的基因﹣載體連接物（重組質粒）都具有抗青霉素的特性．（3）RNA聚合酶與相關基因的啟動子結合，完成的是轉錄過程，轉錄的產物是mRNA．（4）若用第一小問的3種連接產物與無任何抗藥性的原核宿主細胞進行轉化實驗．之后將這些宿主細胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，由于構建基因表達載體時，四環(huán)素抗性基因被破壞，因此能生長的原核宿主細胞所含有的連接產物是載體﹣載體連接物；若接種到含青霉素的培養(yǎng)基中，由于青霉素抗性基因沒有被破壞，因此能生長的原核宿主細胞所含有的連接產物是目的基因﹣載體連接物、載體﹣載體連接物． 所以答案是：（1）載體﹣載體連接物 目的基因﹣目的基因連接物 標記 受體細胞中是否含有目的基因（2）mRNA（3）EcoRI和BamHI（4）載體﹣載體連接物 目的基因﹣載體連接物、載體﹣載體連接物
【考點精析】根據題目的已知條件，利用基因工程的原理及技術的相關知識可以得到問題的答案，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術．