Question

【題目】下面幾幅圖與基因工程有關。圖1為限制酶EcoR I的識別序列，圖2表示目的基因及限制酶切點，圖3表示目的基因上的DNA片段，圖4表示質粒。請回答下列問題：

(l)獲得圖l中目的基因的方法除PCR技術外，還有____。

(2)采用PCR擴增目的基因的原理是___，圖2中A、B、C、D4種單鏈DNA片段中，有___兩種引物(DNA復制方向由3'-5')。

(3)圖3為目的基因中的某一片段，下列有關敘述錯誤的是____（填下列字母，不定項）。

a．該片段的基本骨架由脫氧核糖與磷酸交替連接而成

b．該片段含A-T堿基對比較多，故其結構比較穩(wěn)定

c．若利用PCR擴增該片段，則需解旋酶將①氫鍵全部解開

d．若該目的基因復制6次，則需要堿基A的數量是252個

(4)在構建目的基因表達載體時，用Pst I、EcoR I兩種酶同時切割目的基因和質粒，是為了防止一種酶切割時產生____，從圖2切割下目的基因需要消耗 ____個水分子。不選用限制酶Pst I和HindⅢ同時對質粒和目的基因進行切割的原因是_____。如果大腸桿菌是受體細胞，為使重組質粒較易導入大腸桿菌，需先用____處理大腸桿菌。

Answer 1

【答案】從基因文庫中獲取、人工合成 DNA復制 A、D bcd 目的基因與運載體反向連接 4 會破壞標記基因 氯化鈣

【解析】

1、基因工程又叫DNA重組技術，是指按照人們的意愿，進行嚴格的設計，并通過體外DNA重組和轉基因等技術，賦予生物以新的遺傳特性，從而創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產品。

2、基因工程的工具：

（1）限制酶：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂。

（2）DNA連接酶：連接的是兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵。

（3）運載體：常用的運載體：質粒、噬菌體的衍生物、動植物病毒。

（1）獲得圖1中目的基因的方法有PCR技術、從基因文庫中獲取、人工合成。

（2）采用PCR擴增目的基因的原理是DNA復制，由圖2可知，DNA復制只能從3’到5’，因此構建前利用PCR技術擴增基因時，A、B、C、D四種單鏈DNA片段中應選取A和D作為引物。

（3）a、DNA的基本骨架由脫氧核糖與磷酸交替連接而成，a正確；

b、其結構中G∥C堿基對越多，分子結構越穩(wěn)定，c錯誤；

c、DNA復制時，邊解旋邊復制，故不會將氫鍵全部斷裂，c錯誤；

d、由圖3可知，目的基因堿基A有2個，復制六次需要堿基A的數量為26×2-2=126個，d錯誤。

故選bcd。

（4）在構建目的基因表達載體時，用PstⅠ、EcoRⅠ兩種酶同時切割目的基因和質粒，是為了防止一種酶切割時產生目的基因與運載體反向連接。限制性核酸內切酶破壞的是磷酸二酯鍵，圖中目的基因切割需要破壞4個磷酸二酯鍵，因此需要消耗4個水分子。

由圖可知，不選用限制酶PstⅠ和HindⅢ同時對質粒和目的基因進行切割的原因是會破環(huán)標記基因。如果大腸桿菌是受體細胞，為使重組質粒較易導入大腸桿菌，需先用氯化鈣處理大腸桿菌。