Question

【題目】2011年中國農(nóng)業(yè)大學(xué)獲得了表達TLR4基因的抗病綿羊，這種轉(zhuǎn)基因綿羊加大了對病原體的清除能力。如圖為該TLR4轉(zhuǎn)基因克隆羊的培育過程示意圖，請據(jù)圖回答下列問題：

（1）②過程中是將重組質(zhì)粒而不是將目的基因直接導(dǎo)入受體細胞的原因是_________。促進重組質(zhì)粒進入受體細胞與質(zhì)粒上的______基因有關(guān)。羊胚胎成纖維細胞是否已經(jīng)導(dǎo)入目的基因的篩選方法有______（答出兩點）。

（2）羊胎兒成纖維細胞培養(yǎng)過程中，細胞貼壁生長，數(shù)量不斷增多，往往會發(fā)生______現(xiàn)象，此時，需要用胰蛋白酶消化組織中的______和細胞外的其他成分，獲得單個的成纖維細胞懸浮液。

（3）③過程中需要對羊胚胎成纖維細胞進行______的特殊處理，再取出細胞核，這有利于細胞核的一系列變化和細胞融合后______的啟動。

Answer 1

【答案】因為直接導(dǎo)入，目的基因無法在受體細胞中復(fù)制增殖和穩(wěn)定存在 控制質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)移的 根據(jù)標記基因篩選、DNA雜交技術(shù)篩選 接觸抑制 膠原纖維 營養(yǎng)限制性培養(yǎng)（或調(diào)節(jié)培養(yǎng)基中的牛血清濃度） 基因表達的分子開關(guān)

【解析】

1.基因表達載體的構(gòu)建是實施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。其目的是使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。

2.目的基因的檢測與鑒定的方法：檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，用DNA分子雜交技術(shù)；檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，用分子雜交技術(shù)；檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，用抗原-抗體雜交技術(shù)。

3.動物細胞培養(yǎng)過程中，細胞進行有絲分裂，數(shù)量不斷增多，當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細胞的接觸抑制。貼滿瓶壁的細胞需要用胰蛋白酶等處理，然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，讓細胞繼續(xù)增殖。

（1）將目的基因?qū)�入受體細胞時，必須先構(gòu)建基因表達載體，因為直接導(dǎo)入受體細胞，目的基因無法在受體細胞中復(fù)制增殖和穩(wěn)定存在，不能傳給下一代；促進重組質(zhì)粒進入受體細胞與質(zhì)粒上的控制質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)移的基因有關(guān)，該基因能將插入的目的基因序列轉(zhuǎn)移并整合到生物的染色體上；檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細胞羊胚胎成纖維細胞時，可根據(jù)質(zhì)粒上的抗生素抗性標記進行篩選，也可用DNA分子雜交技術(shù)進行篩選，將單鏈的目的基因片段用放射性同位素標記，進行DNA分子雜交。

（2）在動物細胞培養(yǎng)過程中，細胞貼壁生長，數(shù)量不斷增多，當細胞生長到表面相互接觸時，往往會發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象；故需要用胰蛋白酶消化組織細胞中的膠原纖維和細胞外的其他成分，獲得單個的成纖維細胞懸浮液。

（3）③過程表示取出供體細胞核，進一步進行細胞核移植，需要對羊胚胎成纖維細胞進行營養(yǎng)限制性培養(yǎng)（或調(diào)節(jié)培養(yǎng)基中的牛血清濃度）的特殊處理，再取出細胞核，這有利于細胞核內(nèi)基因的選擇性表達，即有利于細胞核的一系列變化和細胞融合后基因表達的分子開關(guān)的啟動。