Question

【題目】人血清白蛋白（HSA）具有重要的醫(yī)用價值，傳統(tǒng)方法只能從血漿中制備。下圖是以基因工程技術獲取重組HSA (rHSA）的兩條途徑。請據(jù)圖回答：

（1）獲取HSA基因，首先需采集人的血液，提取_____合成總cDNA，然后以cDNA為模板，采用PCR技術擴增HSA基因。下圖中箭頭表示一條引物結合模板的位置及擴增方向，請用箭頭在方框內(nèi)標出標出另一條引物的位置及擴增方向。 __

（2）為了便于HAS基因導入水稻細胞，方框中的“?”一般選用的生物是___，為了提高II過程的導入成功率，通常用_____處理大腸桿菌。

（3）人體合成的初始HSA多肽，需要經(jīng)過膜系統(tǒng)加工形成正確的空間結構才能具有活性，所以，選擇_____途徑（填I或II)獲取rHSA更有優(yōu)勢。

（4）為了鑒定宿主細胞中是否產(chǎn)生rHSA，可以用_____方法來進行檢驗。

A.檢驗HSA基因是否導入 B.檢驗細胞中是否產(chǎn)生相應的mRNA

C．抗原、抗體雜交 D.檢測是否有標記基因

（5）為證明rHSA具有醫(yī)用價值，需確認rHSA與_____的生物學功能一致。

Answer 1

【答案】總RNA （或mRNA） 農(nóng)桿菌 氯化鈣（Ca2＋） I C HSA

【解析】

基因工程技術的基本步驟是：
1、目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。
2、基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

3、將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。
4、目的基因的檢測與鑒定：(1)分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術。(2)個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。據(jù)此答題。

（1）為獲取HSA基因，首先需采集人的血液，提取mRNA通過反轉錄法合成總cDNA，然后以cDNA為模板，采用PCR技術擴增HSA基因。由于DNA兩條鏈是反向平行的，復制時兩條子鏈的延伸也是方向相反，如圖中箭頭表示一條引物結合模板的位置及擴增方向，則另一條引物位于另一條鏈的相反一端。另一條引物位置及延伸方向如圖所示：。

（2）將目的基因導入受體細胞常利用農(nóng)桿菌轉化法，故方框中的“?”一般選用的生物是農(nóng)桿菌。將目的基因導入大腸桿菌，常用Ca2+處理大腸桿菌，使之成為感受態(tài)。

（3）由于大腸桿菌為原核生物，無生物膜系統(tǒng)，而水稻為真核生物，具有生物膜系統(tǒng)，根據(jù)題意：人體合成的初始HSA多肽，需要經(jīng)過膜系統(tǒng)加工形成正確的空間結構才能具有活性，所以選擇I途徑（水稻是真核生物，具有生物膜系統(tǒng)，能對初始rHSA多肽進行高效加工）獲取rHSA更有優(yōu)勢。

（4）由分析可知，可用抗原－抗體雜交技術檢測受體細胞中是否表達出rHSA蛋白，故C符合題意，ABD不符合題意。

（5）為證明rHSA具有醫(yī)用價值，需對基因工程的產(chǎn)物進行鑒定，即確認rHSA與HSA的生物學功能一致。