Question

【題目】某轉(zhuǎn)基因牛的生產(chǎn)技術(shù)流程如圖。請回答：

（1）利用過程①的方法構(gòu)建的基因文庫是____________________（填“基因組文庫”或“部分基因文庫”）；PCR技術(shù)大量擴增此目的基因的前提是__________________________，以便合成引物；PCR擴增過程經(jīng)過變性、復性和__________三個步驟。

（2）轉(zhuǎn)入生長激素基因的�？赏ㄟ^乳腺細胞分泌乳汁來生產(chǎn)人生長激素，過程②中，將目的基因與_________的啟動子等調(diào)控組件重組在一起構(gòu)建重組質(zhì)粒，通過________法導入受精卵中，然后利用胚胎工程的______________________________ (答出2項)技術(shù)手段獲得轉(zhuǎn)基因牛。

（3）該轉(zhuǎn)基因牛進入泌乳期后，其分泌的乳汁中并未含有人的生長激素，可能的原因是_________________________。

Answer 1

【答案】部分基因文庫 要有一段已知目的基因的核苷酸（堿基）序列 延伸 乳腺蛋白基因 顯微注射 早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植 導入的目的基因未能表達或目的基因與運載體反向連接

【解析】

1、基因組文庫為全部基因文庫，cDNA文庫為部分基因文庫，二者的來源不同，前者為DNA用限制酶切割所獲得的一定大小范圍的DNA，后者為mRNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄得到的互補DNA，基因組文庫所包含的信息大于cDNA文庫。

2、基因的表達需要啟動子，啟動子是RNA聚合酶特異性識別和結(jié)合的DNA序列， 若要轉(zhuǎn)入生長激素基因的�？赏ㄟ^乳腺細胞分泌乳汁來生產(chǎn)人生長激素，則人生長激素基因的首端必須含有乳腺蛋白基因的啟動子。

（1）圖示中生長激素基因是通過以mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄形成的，故為部分基因文庫。PCR是一項在生物體外復制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)，利用PCR技術(shù)擴增目的基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列作為引物，以便合成引物；利用PCR擴增目的基因的過程由高溫變性（90～95℃）、低溫復性（55～60℃）、適溫延伸（70－75℃）三個步驟構(gòu)成一個循環(huán)。

（2）過程②為基因表達載體的構(gòu)建，若要人的生長激素基因在牛的乳腺細胞中表達并隨乳汁分泌出來，需要將人的生長激素基因與乳腺蛋白基因的啟動子等調(diào)控組件重組在一起構(gòu)建重組質(zhì)粒。將目的基因?qū)�入動物細胞常用顯微注射法。將導入目的基因的受精卵在體外利用早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)形成早期胚胎，并利用胚胎移植技術(shù)將早期胚胎移植入母牛體內(nèi)孕育成轉(zhuǎn)基因個體。

（3）由于構(gòu)建基因表達載體時運載體不一定和目的基因進行了結(jié)合，以及在結(jié)合目的基因時可能與運載體進行了反向結(jié)合，所以盡管在導入目的基因后檢測到了受體細胞中含有運載體，但這樣的受體細胞中并不會形成目的基因的產(chǎn)物。綜上分析，若該轉(zhuǎn)基因牛進入泌乳期后，其分泌的乳汁中并未含有人的生長激素，可能的原因是導入的目的基因未能表達或目的基因與運載體反向連接。