Question

【題目】基因工程又稱基因拼接技術(shù)和DNA重組技術(shù)，包括以下幾個環(huán)節(jié)：目的基因的獲取→基因表達(dá)載體的構(gòu)建→將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞→目的基因的檢測與鑒定�；卮鹣铝邢嚓P(guān)問題：

（1）在基因工程中，獲取目的基因主要有兩大途徑，即____________和從生物材料中分離。如果利用某植物為材料，同時構(gòu)建cDNA文庫和基因組文庫，兩者相比cDNA文庫中含有的基因數(shù)目比基因組文庫中的__________（多/少）。

（2）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時，經(jīng)常使用質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，其應(yīng)具備的基本條件有__________（答出兩點(diǎn)即可）。除滿足上述基本條件外，還需具有啟動子和終止子。啟動子是__________酶識別并結(jié)合的部位。這一步驟中通常還會利用到DNA連接酶，常見的有E·coliDNA連接酶和T4DNA連接酶，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是__________。

（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞時，如果受體為植物細(xì)胞，采用最多的方法是__________，如果受體為動物細(xì)胞，采用最多的方法是__________。

（4）最后，要檢測轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入了目的基因，經(jīng)常采用的檢測方法是_______________。

Answer 1

【答案】 人工合成 少 能夠自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因、具有一個至多個限制酶切割位點(diǎn) RNA聚合 T4DNA連接酶 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 顯微注射技術(shù) DNA分子雜交技術(shù)

【解析】試題分析：1、基因文庫是指將含有某種生物不同基因的許多DNA片段，導(dǎo)入到受體菌的群體中儲存，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因�；�因組文庫包含某種生物所有的基因；部分基因文庫包含某種生物的部分基因，如cDNA文庫。
2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建：
①過程：用同一種限制酶切割目的基因和運(yùn)載體，再用DNA連接酶將目的基因和運(yùn)載體連接形成重組DNA分子；
②目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并且可以遺傳給下一代并表達(dá)和發(fā)揮作用；
③基因表達(dá)載體的組成：目的基因+啟動子+終止子+標(biāo)記基因。

3、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
4、目的基因的檢測與鑒定：（1）分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)；（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）在基因工程中，獲取目的基因主要有兩大途徑，即人工合成和從生物材料中分離。人工合成可通過反轉(zhuǎn)錄法或人工化學(xué)合成法，含有的基因數(shù)目比基因組文庫中的少。

（2）質(zhì)粒作為基因工程常用載體必須具備的條件是能夠自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因、具有一個至多個限制酶切割位點(diǎn)�；�因表達(dá)載體的組成有目的基因+啟動子+終止子+標(biāo)記基因，其中啟動子是RNA聚合的識別位點(diǎn)。常見的DNA連接酶有E·coliDNA連接酶和T4DNA連接酶，其中T4DNA連接酶既能連接黏性末端又能連接平末端。

（3）將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞常用的方法是顯微注射法。

（4）檢測目的基因是否導(dǎo)入成功一般用基因探針，技術(shù)是DNA分子雜交技術(shù)，原理是堿基互補(bǔ)配對原則。