Question

（1）過程①所需要的酶是　　　　　。

（2）在構(gòu)建基因表達載體過程中，應(yīng)用限制性核酸內(nèi)切酶　　 　切割質(zhì)粒，用限制性核酸內(nèi)切酶　 　 切割目的基因。用限制酶切割目的基因和運載體后形成的黏性末端通過___________　　 原則進行連接。人的基因之所以能與大腸桿菌的DNA分子進行重組，原因是　　　　 　　　　 。

（3）在過程③一般將受體大腸桿菌用_________處理，以增大　　　　　的通透性，使含有目的基因的重組質(zhì)粒容易進入受體細胞。

（4）將得到的大腸桿菌B涂布在一個含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上得到如下圖a的結(jié)果（黑點表示菌落），能夠生長的細菌中已導(dǎo)入了　　　　　　 ，反之則沒有導(dǎo)入；再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基a上，使絨布表面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖b的結(jié)果（空圈表示與a對照無菌落的位置）。與圖b空圈相對應(yīng)的圖a中的菌落表現(xiàn)型是　　　　　　　　 ，這些細菌中導(dǎo)入了________________。

（5）人體的生長激素基因能在細菌體內(nèi)成功表達是因為　　　　　　　　　　　　 。寫出目的基因?qū)�入細菌中表達的過程　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

Answer 1

【答案】 29、（1）逆轉(zhuǎn)錄酶　�。�2）I　　II  　堿基互補配對　　人的基因與大腸桿菌DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)相同　�。�3）CaCl₂　  細胞壁　�。�4）普通質(zhì)�；蛑亟M質(zhì)粒  　抗氨芐青霉素和四環(huán)素抗性　　重組質(zhì)�！　。�5）共用一套密碼子   生長激素基因——>mRNA——>生長激素

【解析】（1）目的基因的獲取途徑有三條，從圖中可以明顯地看出，是通過逆轉(zhuǎn)錄法這一人工合成法來獲取的，過程①是逆轉(zhuǎn)錄過程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶。

（2）由圖看以看出在質(zhì)粒中基因Ⅱ的位置插入的目的基因，只能用限制性核酸內(nèi)切酶Ⅰ切割質(zhì)粒，如果使用限制性核酸內(nèi)切酶Ⅱ切割的話，在質(zhì)粒的基因Ⅰ的位置也會切割；目的基因的兩端都要切割，所以應(yīng)該選擇限制性核酸內(nèi)切酶Ⅱ切割。用限制酶切割目的基因和運載體后形成的黏性末端通過堿基互補配對原則進行連接。人的基因之所以能與大腸桿菌的DNA分子進行重組，原因是人的基因與大腸桿菌DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)相同。人的生長激素基因與大腸桿菌的DNA分子進行重組，說明人的基因與大腸桿菌DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)相同，即基因是生物遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能的基本單位。根據(jù)限制酶的專一性特點，可知在構(gòu)建基因表達載體過程中，應(yīng)用限制酶Ⅰ切割質(zhì)粒，用限制酶Ⅱ酶切割目的基因。

（3）將目的基因?qū)�入到細菌細胞中的方法是鈣離子處理法，使其細胞壁通透性增強，便于將目的基因形成的重組DNA分子進入。

（4）在氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能形成菌落的，說明導(dǎo)入了普通質(zhì)粒或重組質(zhì)粒，再在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖b的結(jié)果（空圈表示與a對照無菌落的位置）。與圖b空圈相對應(yīng)的圖a中的菌落表現(xiàn)型，形成菌落是含有抗氨芐青霉素和四環(huán)素抗性，不能形成菌落的是含有重組質(zhì)粒的細菌。

（5）其目的基因能成功地在大腸桿菌中得以表達，則說明人和細菌等生物共用一套（遺傳）密碼子。其表達的過程是：人的生長激素基因，通過轉(zhuǎn)錄形成信使RNA；再通過翻譯，形成人的生長激素。其場所在細菌體內(nèi)，所用的核苷酸和氨基酸等原料均來自于細菌體內(nèi)。目的基因在受體細胞內(nèi)表達原因是共用一套完全相同的密碼子，目的基因表達過程為生長激素基因——> mRNA——>生長激素。